厌氧微生物滚管技术操作

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厌氧微生物滚管技术操作

2024-07-07 03:09| 来源: 网络整理| 查看: 265

1. 厌氧微生物滚管分离技术

亨盖特厌氧滚管技术(Hungate Anaerobic Roll-Tube Technique) 是美国微生物生态学家亨盖特于20世纪50年代发明的用于厌氧微生物分离纯化的技术方法,并由后来研究者不断改进完善。厌氧滚管技术可用于各类严格厌氧型微生物的分离纯化,包括硝酸盐还原菌、发酵性细菌、硫酸盐还原菌等。本实验室将滚管技术用于纤维素发酵产生物燃料的梭状芽孢杆菌、用于重金属六价铬还原性生物修复的硝酸盐还原菌和硫酸盐还原菌等。每个厌氧实验室的厌氧操作方法各不相同,这里只是为了介绍厌氧菌分离纯化的操作方法和强调厌氧操作的原理。应该特别强调的是,本操作流程最大的优点是省却了滚管机,所以一般实验室无须特地购置滚管机也可以做滚管分离实验。

厌氧操作应注意最基本两个点:无菌和无氧。

无菌:和普通有氧微生物实验一样,厌氧微生物实验必须坚持无菌操作。在通氮气保护滚管厌氧环境时,应该利用酒精灯火焰使管口周围保持无菌状态。利用注射器针头转接培养物前,用酒精拭片或棉球擦拭滚管橡胶盖子表面。打开的盖子如果不小心接触其它表面,也用酒精拭片擦拭后再重新盖入试管。在厌氧手套箱中转接培养物,因其内部无氧而无法用火焰,这种情况下其实是非严格的无菌操作,请务必尽量缩短培养物在厌氧箱气相空间中的暴露时间,减少受污染概率。

无氧:在开发空间实验台上进行厌氧操作时,厌氧状态是由连续通氮气来实现的。由于和外界空气是相通的,气流扰动会使少量氧气接触到厌氧培养物,所以厌氧操作需缩短操作时间,尽量减少氧气对厌氧微生物的抑制。有时我们在没有氮气保护的情况下打开一个含菌落的厌氧滚管,如果只须从一个试管里挑一个菌落迅速转接到液培,这种情况下虽然不是严格厌氧,但是由于我们不再使用原来的厌氧管,不在这个试管中实行氮气保护仍然可接受;但是要从同一滚管中挑多个菌落时,应该另接一个通气口使用氮气保护。具体情况根据该培养物的耐氧特性酌情处理。



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