（二）镜检与接种

若镜下查见革兰阴性菌或革兰阳性菌，从厌氧瓶中取培养物接种厌氧血琼脂平板和需氧血琼脂平板，分别置厌氧环境（厌氧盒、厌氧罐、厌氧气袋、厌氧培养箱）和需氧环境35℃培养 24～48 h，观察生长情况。

若查未见细菌，进行瑞氏染色并结合细菌生长曲线，确定是否假阳性？若确定假阳性后，厌氧血琼脂平板置厌氧环境，培养24 ～48h后观察生长情况，将血培养瓶放回培养箱中。

二、培养与鉴定Culture and identification

（一）培养

培养24～48 h后，打开两种血琼脂平板观察，若厌氧环境生长，需氧环境不生长，初步考虑厌氧菌。再从厌氧血琼脂平板上挑取菌落接种在三块血平板（厌氧血琼脂平板、两块需氧血平板），分别置需氧环境、厌氧环境和二氧化碳环境培养24 ～48h，观察生长情况。见图4-

注：“ +”为有细菌生长，“-”为无细菌生长，“d”为不生长或生长不佳

（二）鉴定

1. 初步鉴定

挑取厌氧血琼脂平板上菌落涂片，根据菌落特征和镜下形态, 可以初步推测厌氧菌的种类（表 ）。

2 仪器鉴定

（1 ）选择鉴定卡片，用棉签从厌氧血琼脂平板上挑取菌落制成菌悬液，使用VITEK-ANC、MicroScan-RAID、IATBR-APID ID32A等自动微生物鉴定系统鉴定，4h即可判断结果。

（2 ）API 20A 鉴定系统：该系统是一种半定量的微量鉴定系统，也可用于检测细菌酶的活性。

（3 ）MALDI-TOF鉴定

（4）测序技术

（三）结果解释

1. 在需氧血培养瓶、厌氧血培养瓶均报警，涂片均为革兰阴性杆菌时，需氧瓶转需氧血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板，厌氧瓶转需氧血琼脂平板，但厌氧瓶只接种需氧血琼脂平板需氧培养是不够的，若遇到革兰阴性厌氧菌和兼性厌氧菌同时存在的情况，且在涂片形态上没有明显差异，这样会造成厌氧菌漏检。因此除了接种需氧血琼脂平板需氧培养，还需增加一块厌氧血琼脂平板置厌氧环境，可以避免厌氧菌漏检。

2. 厌氧血培养瓶阳性报警、需氧血培养瓶不报警，接种厌氧和需氧血琼脂平板分别置厌氧和需氧环境培养，若两种平板均生长，尤其要仔细观察厌氧血琼脂平板的菌落，有时会发现需氧菌生长优势，易覆盖菌落太小的厌氧菌，不易发现，需用放大镜观察菌落。

3. 多数厌氧菌生长速度较需氧菌缓慢，血培养仪需要3～5d 报警阳性；但梭菌属、 拟杆菌属、普雷沃菌属生长速度与肠杆菌科细菌相近，多数可在4 8h内报警阳性。血培养仪设置5d 为培养周期，仅满足临床主要厌氧菌生长，如临床考虑特殊厌氧菌感染，可手工设置延长培养时间。

4. 有些兼性厌氧菌在厌氧瓶中报阳时间早于需氧瓶（如肠杆菌科细菌）；有些苛养菌在厌氧瓶中比在需氧瓶中生长好（如肺炎链球菌），甚至部分苛养菌在需氧瓶中不生长。

5. 若发现血培养瓶瓶帽明显鼓出，说明瓶内细菌产生大量气体，需先在生物安全柜中放气，需然后再抽取培养物防止液体喷出。

6. 有些革兰阳性菌，如梭菌、消化链球菌和真杆菌等，若培养时间较长，可能变为革兰阴性菌，可用拉丝试验鉴别（3 ％KOH滴于玻片上.取1环细菌与之混匀，60s用接种环轻轻挑起，能拉丝为革兰阴性菌，不能拉丝为革兰阳性菌）。

7. 值得一提的是，有些实验室因厌氧血琼脂平板用量少、购置难而不愿开展厌氧菌血培养。建议用普通血琼脂平板暂代厌氧血琼脂平板，若厌氧血培养瓶报阳，取培养物接种两块普通血琼脂平板，一块置厌氧环境，一块置需氧环境，若24～48h后两块平板都生长为兼性厌氧菌；若厌氧环境平板生长，需氧环境平板不生长为厌氧菌；若两个环境平板都不生长，再购置厌氧血平板或自制厌氧血平板。

8. 血培养瓶涂片及接种务必在生物安全柜内进行，尤其是3天以上报阳性的血培养瓶以避免布鲁菌等细菌气溶胶污染的风险。

参考文献

[1]周庭银, 临床微生物学诊断与图解[M].第4版.上海：上海科技出版社，2017.

[2] JAMES H. JORGENSENMICHAEL A. PFALLER. Maunal of Clinical Microbiology (11th ed). American Society for Microbiology. Washington 2015

[3] 主编.王辉、任建康、王明贵临床微生物学检验北京：人民卫生出版社，2015. 返回搜狐，查看更多