一.目的要求：1.了解常用器皿的清洗，仪器设备的原理和使用。2. 掌握常用仪器设备的使用方法及在使用中应注意的事项。

微生物学实验室所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。一般，玻璃器皿的质量要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂烧灼而不致破损；器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤方法不恰当也会影响实验结果。本节将对这几方面作详细介绍。二.器皿的种类、要求与应用1．试管（test tube）微生物学实验室所用玻璃试管，其管壁必须比化学实验室用的厚些，这样在塞棉花塞时，管口才不会破损。试管的形状要求没有翻口（图Ⅰ-1，A），不然，微生物容易从棉塞与管口的缝隙间进入试管（图Ⅰ-1，B）而造成污染。此外，现在有不用棉塞而用铝制或塑料制的试管帽（图Ⅰ-1，C），若用翻口试管也不便于盖试管帽。有的实验要求尽量减低蒸发试管内的水分，则需使用螺口试管（图Ⅰ-1，D），盖以螺口胶木或塑料帽。试管的大小可根据用途的不同，准备下列三种型号。（1）大试管（约18×180mm）可盛倒培养皿用的培养基；亦可作制备琼脂斜面用（需要大量菌体时用）。（2）中试管（约13—15×100—150mm）盛液体培养基或做琼脂斜面用，亦可用于病毒等的稀释和血清学试验。　　（3）小试管（10—12×100mm）一般用于糖发酵试验或血清学试验，和其他需要节省材料的试验2．德汉氏试管（Durham tube）观察细菌在糖发酵培养基内产气情况时，一般在小试管内再套一倒置的小套管（约6×36mm）（图I-2），此小套管即为德汉氏试管，又称发酵小套管。3．吸管（又称移液管，pipette）　（1）玻璃吸管（glass pipette）微生物学实验室一般要准备1、5、10ml的刻度玻璃吸管（图I-3，A）。与化学实验室所用的不同，其刻度指示的容量往往包括管尖的液体体积，亦即使用时要注意将所吸液体吹尽，故有时称为“吹出”吸管。市售细菌学用吸管，有的在吸管上端刻有“吹”字。除有刻度的吸管外，有时需用不计量的毛细吸管，又称滴管（图Ⅰ-3，B），来吸取动物体液和离心上清液以及滴加少量抗原、抗体等。　（2）活塞吸管（piston pipette）主要用来吸取微量液体，故又称微量吸液器或微量加样器。其外形和结构如图Ⅰ-4，除塑料外壳外，主要部件有按钮、弹簧、活塞和可装卸的吸嘴。按动按钮，通过弹簧使活塞上下活动，从而吸进和放出液体。其特点是容量固定，使用时不用观察刻度，操作方便、迅速。国内产品一般每个活塞吸管固定一种容量，分别有5、10、20、25、50、100、200、500、1000μl等不同容量。而精制的活塞吸管每个在一定的范围内可调节几个容积，例如在5—25μl的范围内，可调节5、10、15、20、25μl五个不同的量，使用时按需要调节，但当调节固定后，每吸一次，容量仍是固定的。用毕只需调换吸嘴或将吸嘴洗净，消毒后再行使用。　　活塞吸管是国外70年代后半期才开始生产与应用的，近年来国内亦日益广泛应用于免疫学和使用同位素等的科学实验中。4．培养皿（petridish）常用的培养皿（图Ⅰ-5），皿底直径90mm，高15mm。培养皿一般均为玻璃皿盖，但有特殊需要时，可使用陶器皿盖，因其能吸收水分，使培养基表面干燥，例如测定抗生素生物效价时，培养皿不能倒置培养，则用陶器皿盖为好。在培养皿内倒入适量固体培养基制成平板，用于分离、纯化、鉴定菌种、微生物计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。5．三角烧瓶（Erlenmeyerflask）与烧杯（beaker）三角烧瓶有100、250、500、1000ml等不同的大小，常用来盛无菌水、培养基和摇瓶发酵等。常用的烧杯有50、100、250、500、1000ml等，用来配制培养基与药品。6．注射器（injector）一般有1、2、5、10、20、50ml等不同容量的注射器。注射抗原于动物体内可根据需要使用1、2和5ml的；抽取动物心脏血或绵羊静脉血可采用10、20、50ml的。微量注射器有10、20、50、100μl等不同的大小。一般在免疫学或纸层析等实验中滴加微量样品时应用。7．载玻片（slide）与盖玻片（cover slip）普通载玻片大小为75×25mm，用于微生物涂片、染色，作形态观察等。盖玻片为18×18mm。凹玻片是在一块厚玻片的当中有一圆形凹窝（图Ⅰ-6），作悬滴观察活细菌以及微室培养用。8．双层瓶（double bottle）由内外两个玻璃瓶组成（图Ⅰ-7），内层小锥形瓶盛放香柏油，供油镜头观察微生物时使用，外层瓶盛放二甲苯，用以擦净油镜头。9．滴瓶（dropper bottle）用来装各种染料、生理盐水等（图Ⅰ-8）。10．接种工具接种工具有接种环（inoculating loop）、接种针（inocula-ting needle）、接种钩（inoculating hook）、接种铲（inocula-ting shovel）、玻璃涂布器（glass spreader）等（图Ⅰ-9）。制造环、针、钩、铲的金属可用铂或镍，原则是软硬适度，能经受火焰反复烧灼，又易冷却。接种细菌和酵母菌用接种环和接种针，其铂丝或镍丝的直径以0．5mm为适当，环的内径约2mm，环面应平整。接种某些不易和培养基分离的放线菌和真菌，有时用接种钩或接种铲，其丝的直径要求粗一些，约1mm。用涂布法在琼脂平板上分离单个菌落时需用玻璃涂布器，是将玻棒弯曲或将玻棒一端烧红后压扁而成。三.玻璃器皿的清洗方法清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，因此，玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。现分述如下：　　　1．新玻璃器皿的洗涤方法　　新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时。酸溶液一般用2％的盐酸或洗涤液（见本小节“3”）。浸泡后用自来水冲洗干净。　　2．使用过的玻璃器皿的洗涤方法　　(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强，可有效地洗去器皿上的油污。洗衣粉和去污粉较难冲洗干净而常在器壁上附有一层微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗，然后倒置于铁丝框内或有空心格子的木架（图Ⅰ-10）上，在室内晾干。急用时可盛于框内或搪瓷盘上，放烘箱烘干。　　玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。　　装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤前先浸在2％煤酚皂溶液（来苏尔）或0．25％新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤。带病原菌的培养物最好先行高压蒸汽灭菌，然后将培养物倒去，再进行洗涤。　　盛放一般培养基用的器皿经上法洗涤后，即可使用，若需精确配制化学药品，或做科研用的精确实验，要求自来水冲洗干净后，再用蒸馏水淋洗三次，晾干或烘干后备用。　　(2)玻璃吸管吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛细吸管），使用后应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内，免得干燥后难以冲洗干净。量筒或标本瓶底部应垫以脱脂棉花，否则吸管投入时容易破损。待实验完毕，再集中冲洗。若吸管顶部塞有棉花，则冲洗前先将吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，用水将棉花冲出，然后再装入吸管自动洗涤器内冲洗，没有吸管自动洗涤器的实验室可用冲出棉花的方法多冲洗片刻。必要时再用蒸馏水淋洗。洗净后，放搪瓷盘中晾干，若要加速干燥，可放烘箱内烘干。　　吸过含有微生物培养物的吸管亦应立即投入盛有2％煤酚皂溶液或0．25％新洁尔灭消毒液的量筒或标本瓶内，24小时后方可取出冲洗。　　吸管的内壁如果有油垢，同样应先在洗涤液内浸泡数小时，然后再行冲洗。　　(3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10分钟，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗，然后在稀洗涤液中浸泡0．5—2小时，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95％酒精中保存备用。使用时在火焰上烧去酒精。用此法洗涤和保存的载玻片和盖玻片清洁透亮，没有水珠。　　检查过活菌的载玻片或盖玻片应先在2％煤酚皂溶液或0．25％新洁尔灭溶液中浸泡24小时，然后按上法洗涤与保存。　　3．洗涤液的配制与使用　　（1）洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下：　　浓溶液 重铬酸钠或重铬酸钾（工业用） 50g　　　　　　自来水 150ml　　　　　　浓硫酸（工业用） 800ml　　稀溶液 重铬酸钠或重铬酸钾（工业用） 50g　　　　　　自来水 850ml　　　　　　浓硫酸（工业用） 100ml　　配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温，使溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。　　配好后的洗涤液应是棕红色或桔红色。贮存于有盖容器内。　　（2）原理 重铬酸钠或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸（chro-mic acid），酪酸的氧化能力极强，因而此液具有极强的去污作用。　　（3）使用注意事项 （a）洗涤液中的硫酸具有强腐蚀作用，玻璃器皿浸泡时间太长，会使玻璃变质，因此切忌到时忘记将器皿取出冲洗。其次，洗涤液若沾污衣服和皮肤应立即用水洗，再用苏打水或氨液洗。如果溅在桌椅上，应立即用水洗去或湿布抹去；（b）玻璃器皿投入前，应尽量干燥，避免洗涤液稀释；（c）此液的使用仅限于玻璃和瓷质器皿，不适用于金属和塑料器皿；（d）有大量有机质的器皿应先行擦洗，然后再用洗涤液，这是因为有机质过多，会加快洗涤液失效，此外，洗涤液虽为很强的去污剂，但也不是所有的污迹都可清除；（e）盛洗涤液的容器应始终加盖，以防氧化变质；（f）洗涤液可反复使用，但当其变为墨绿色时即已失效，不能再用。　　三、空玻璃器皿的包装　　1．培养皿的包装　　培养皿常用旧报纸密密包紧，一般以5—8套培养皿作一包，少于5套工作量太大，多于8套不易操作。包好后行于热灭菌。如将培养皿放入铜筒内进行干热灭菌，则不必用纸包，铜筒有一圆筒形的带盖外筒，里面放一装培养皿的带底框架（图Ⅰ-11），此框架可自圆筒内提出，以便装取培养皿。　　2．吸管的包装　　准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0．5cm处，塞一小段约1．5cm长的棉花，以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧恰当，过紧，吹吸液体太费力；过松，吹气时棉花会下滑。然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的近左端，与报纸约呈45度角（图I-12），并将左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打一小结。如此包好的很多吸管可再用一张大报纸包好，进行干热灭菌。　　　如果有装吸管的铜筒（图Ⅰ-13），亦可将分别包好的吸管一起　　装入铜筒，进行干热灭菌；若预计一筒灭菌的吸管可一次用完，亦可不用报纸包而直接装入铜筒灭菌，但要求将吸管的尖端插入筒底，粗端在筒口，使用时，铜筒卧放在桌上，用手持粗端拔出。　　3．试管和三角烧瓶等的包装　　试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞（做棉塞的方法见实验十九），然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用两层报纸（不可用油纸）与细线包扎好，进行干热灭菌。试管塞好棉花塞后也可一起装在铁丝篓中，用大张报纸将一篓试管口做一次包扎，包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。　　空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若需湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面最好再加一层牛皮纸。　　如果试管是盖的铝帽，则不必包纸，可直接干热灭菌。用塑料帽，则宜湿热灭菌。