一、实验目的

    掌握紫外分光光度法测定棉籽油中游离棉酚含量的原理与方法。

    二、实验原理

    样品中游离棉酚经丙酮提取后，在378nm波长处有最大吸收，其吸光度与棉酚量在一定范围内成正比，与标准品比较，可进行定量分析。

    三、仪器与试材    。

    1．仪器与器材

    紫外分光光度计、振荡器、具塞锥形瓶、比色管等。

    2．试剂

    除特别说明外，实验所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

    (1)常规溶液：丙酮溶液(70％，体积分数)。

    (2)棉酚标准溶液(100μg／mL)：称取棉酚5.0mg，用丙酮溶解并定容至50mL。

     3．实验材料    

     3～4种棉籽油，各50g。

     四、实验步骤

     1．样品提取    

    称取1．00g棉籽油于100mL具塞锥形瓶中，加入20mL丙酮溶液和3～5颗玻璃珠，在振荡器中振荡30min，于4℃静置过夜。取上清液过滤，滤液即为样品提取液。

     2．标准曲线的绘制

    (1)分别吸取0、0．5mL、1．0mL、1．5mL、2．0mL、2．5mL棉酚标准溶液(相当于0、50μg、100μg、150μg、200μg、250μg棉酚)于l0mL比色管中，用丙酮溶液稀释至刻度，摇匀，静置10min。

    (2)以丙酮溶液作空白对照，以石英比色皿于378nm处测吸光度，以棉酚的质量为横坐标，A378nm为纵坐标，绘制标准曲线。

    3．样品测定

    取适量样品提取液于石英比色口IL中，于378nm处测定A378nm值，由标准曲线中查出提取液中棉酚的质量。

    4．计算

    按下式计算样品中游离棉酚的含量：

                            X=（m'/m×1000×1000）×100×2

    式中，X为样品中游离棉酚的含量，％；m’为从标准曲线中查得的样品提取液中棉酚的质量，μg；m为样品的质量，g。

  五、注意事项

  实验中样品的用量应根据棉籽油的精制程度适当调整。例如，粗制棉籽油样品的用量可减少至0.20g。