25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3是体内维生素D的两种存在形式，25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的正常值为25-150nmol/L(10-60ng/ml)，也就是体内维生素D的参考值。

由于25-羟基维生素D2在体内含量较少，因此，临床上不会单独测量25-羟基维生素D2，主要用25-羟基维生素D3来衡量维生素D的水平。

多数高等动物表皮及皮肤组织中的7-脱氢胆固醇经阳光或紫外线照射后可转化为维生素D3，无生物学活性。

25-羟基维生素D3作用的靶器官主要是小肠、骨骼和肾脏，对钙、磷代谢的调节作用是升高血钙和血磷，调节骨盐溶解和沉积，促进骨的生长和更新。

如果维生素D的检测值低于参考值下限，则为维生素D缺乏，主要见于日光照射减少、佝偻病、骨质疏松、骨软化病、重症肝脏疾病、慢性肾功能不全、甲状旁腺功能减退等。

如果维生素D的检测值高于参考值上限，主要见于维生素D中毒、原发性甲状旁腺功能亢进、肿瘤性高钙血症、妊娠后期等。

25-羟维生素D水平是人体内营养状态评定的最佳标准，是国际公认的维生素D缺乏性佝偻病诊断指标。同时还可联合其他骨代谢指标广泛用于诊断肿瘤、骨质疏松症和克罗恩病等疾病。