qPCR 曲线异常问题通常分为两大类：扩增曲线异常、融解曲线异常。

扩增曲线异常

这个问题可能涉及到多种原因，主要可以归结为以下 6 种：

（1）扩增曲线不光滑

主要有两个原因：

一是扩增信号太弱，经系统矫正后，就产生这样抖啊抖的线，小编建议大家提高模板浓度重复实验。

二是仪器本身的问题，可能在扩增过程中仪器出现了波动或者本身该检测孔出现了异常。

（2）扩增曲线断裂或下滑

比较典型的曲线下滑如上图所示，主要原因是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线就趴下来啦～

这种情况大家也不要慌，可以减小基线终点（例如基线期默认 3 - 15 个循环，改为 3 - 10 个循环），重新分析数据，一般都能得到一个比较好的结果。

（3）个别扩增曲线骤降

这是比较常见的一个问题，反应管内若留有气泡，温度升高后会导致气泡破裂，使仪器检测到的荧光值突然降低。所以大家进行扩增反应之前，一定要仔细检查反应管内是否有气泡残留。

（4）扩增曲线呈锯齿状且不连续

这个可以参考上图，这是典型的 ROX 添加不当导致的异常结果，曲线杂乱。大家首先可以尝试去掉 ROX 分析数据，看一下重复性是否 OK（复孔间 STD