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本试剂盒是基于M-MuLV反转录酶和热启动Taq DNA聚合酶，具有高效合成能力和高扩增效率。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，用第一链cDNA合成预混液进行反转录，然后用2×HotStart Taq PCR MasterMix进行扩增。本试剂盒含有从RNA到cDNA，以cDNA为模板进行扩增的全部试剂。 操作简单：操作步骤少，降低污染。特异性高：使用HotStart Taq酶进行扩增，减少非特异性反应。组分规格2×BalbScript 1st cDNA SuperMix500μL2×HotStartTaq Master Mix1mL×2 RNase Free Water1mL 保存：-20℃本试剂盒进行PCR扩增时延伸时间为1kb/min，客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。如果同时操作多个样品，建议先在冰上先配制预混液，然后再分装到各个反应管中，加入模板启动反应。反应扩增时出现目标条带拖带，系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致，可对模板及引物浓度等进行调整；反应出现杂带，可对退火温度进行调整，或重新设计特异性高的引物。为了保证反应的正常进行，需使用高质量的RNA模板。第一链cDNA合成试剂融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。按顺序加入以下反应物：成分用量模板RNA总RNA(0.1ng～5μg)poly(A) mRNA(10pg)特异性RNA(0.01pg)2×BalbScript 1st cDNA SuperMix10μLRNase Free Water至20μL可选步骤：如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65℃孵育5分钟（有助于打开高级结构，便于下一步反应的进行），迅速置于冰上冷却，再加入其它组分。轻轻混匀，离心。42℃孵育15～30分钟（如果RNA模板中不含poly A结构，25℃先孵育5分钟，随后42℃孵育15～30分钟）。产物可直接用于下一步反应。如果不立即使用，可于-20℃保存一周，长时间保存建议-70℃放置。第一链cDNA的PCR扩增合成的第一链cDNA可直接用于PCR。常用反应体系（20μL）：成分用量2×HotStart Taq Master Mix10μL上游引物0.2～1.0μM（终浓度）下游引物0.2～1.0μM（终浓度）模板1～2μLddH2O至20μL常用PCR循环：当扩增片段＜3K：温度时间循环数94℃5分钟194℃20秒30 50～60℃20秒72℃60秒/kb72℃5分钟14℃保温1当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：温度时间循环数94℃5分钟194℃5秒 30 68℃60秒/kb72℃5分钟14℃保温1相关搜索：两步法RT-PCR试剂盒，两步法，Two-Step，RT-PCR，通用型，反转录，逆转录，RNA模板，总RNA，mRNA，Taq酶，热启动，HotStart，BalbScript Two-Step RT-PCR Kit
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