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作者：

武力森

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摘要：

脑利钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)是由心肌细胞分泌包含32个氨基酸残基的多肽,具有促进排钠、排尿、舒张血管,可对抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的缩血管作用。重组人脑利钠肽(Recombinant human Brain Natriuretic Peptide,rhBNP)是人脑利钠肽基因体外表达的产物,是治疗心衰的临床用药。论文分为两个部分。第一部分,根据血液中存在的二肽基肽酶DPP-Ⅳ可能对BNP发挥特异性切割作用,从而降低血液BNP浓度(活性),体外表达、纯化出纯度大于98%的rhBNP,建立了体外DPP-Ⅳ酶切rhBNP方法,DPP-Ⅳ最佳酶切条件:DPP-Ⅳ与rhBNP终浓度比1:500、酶切时间4 h、酶切缓冲体系20 mmol/l Tris-HCl pH7.8。建立了基于HPLC鉴定DPP-Ⅳ酶切产物的方法并纯化获得纯度大于95%的3-32BNP。采用稳转BNP受体细胞系,结合特异性ELISA方法,比较了酶切前后rhBNP生物学活性,3次实验结果经统计学t检验算出P(rhBNP、酶切rhBNP)=0.0716>0.05,rhBNP酶切前后生物学活性没有明显变化。第二部分,采用了ELISA、SPR两种技术,对在研的rhBNP产品HF-01与国外原研产品奈西利肽进行了生物学活性比较。应用ELISA分析技术,3次实验结果经统计学t检验算出P(奈西利肽、HF-01)=0.8496>0.05,表明在研产品与国外原研产品生物学活性基本一致。SPR方法基本完成建立,摸索SPR检测条件:偶联量6 000 RU,BNP抗体与芯片表面氨基偶联环境10 mmol/l pH 4.5 NaAc缓冲液,芯片再生缓冲液pH3.0甘氨酸-HCl,分析物浓度大于0.39μmol/l,小于0.78μmol/l。建立的SPR方法有待于样品检测分析。

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关键词：

人脑利钠肽 3-32BNP 生物学活性测定 表面等离子体基原共振 酶联免疫吸附测定 DPP-Ⅳ