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动物固体组织蛋白提取

Protocol 

1

、

前夜将磁珠及匀浆管洗净置入

75%

乙醇中浸泡。早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也

可放入烤箱中，速度较快。

2

、

裂解液配制：

RIPA

：

PMSF=100

：

1

，现配现用。

（

1000ulRIPA+10ulPMSF

）

。置入

4

℃冰

上。

3

、抽蛋白（应冰上进行）

：

a

、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。一般

10ml

管体系中加入：

7-8

粒磁珠、

100mg

组织、

1mlRIPA+10ulPMSF

、

1 tablet Cocktail

。

b

、匀浆。

手工匀浆

：

将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，

再将剩余的

1/3

匀浆介质或生理盐水冲洗残留

在烧杯中的碎组织块，

一起倒入匀浆管中进行匀浆，

左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合

物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（

6

～

8

分钟）

，充分研碎，

使组织匀浆化。

机器匀浆

：

用组织捣碎机

10000

～

15000r/min

上下研磨制成

10

％组织匀浆，

也可用内切式组

织匀浆机制备（匀浆时间

10

秒

/

次，间隙

30

秒，连续

3

～

5

次，在冰水中进行）

，皮肤、肌

肉组织等可延长匀浆时间。

超声粉碎

：用超声粉碎机进行粉碎，可用

Soniprep150

型超声波发生器以振幅

14

微米超声

处理

30

秒使细胞破碎，

也可用国产超声波发生仪，

用

40

安培，

5

秒

/

次，

间隙

10

秒反复

3

～

5

次。

反复冻融

：

培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，

也可以反复冻溶

3

次左右

（即让细

胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，

溶解，

再结冰，

再溶解，反复

3

次左右）

，

但有部分酶活力会受影响。