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2024-07-14 23:15| 来源: 网络整理| 查看: 265

常见问题

1. 蛋白电泳示踪染料溴酚蓝扭曲、电泳时间大幅度延长:       ●可能是内槽缓冲液泄漏导致。建议重新夹胶板,防止在电泳过程中内槽液面逐步降低;

2. 使用自己配制的其它体系电泳缓冲液电泳后条带较模糊:      ●本预制胶为中性,对电泳缓冲液的要求比传统pH8.8的分离胶要高,缓冲液配制不当,或长期放置变质,都会对本预制胶的蛋白电泳效果产生影响;

3. 电压为150V电泳时,一块胶的电流在80mA左右,2块胶的电流在140mA左右,随着时间增加电流会逐步降低。如果电流明显不在这一范围,需检查电泳液的质量,电极是否插反及内槽电泳液是否有漏液现象;

4. 湿转时,需120V恒压转膜60~90min。为达到更好的转膜效果,可以根据预制胶上残留的或膜上的预染蛋白分子量标准确定转膜效率,并对转膜条件进行适当调整。目的蛋白的分子量,凝胶浓度及转膜液中的甲醇浓度都会影响转膜效率。大蛋白尽量选择低浓度的胶。蛋白分子量100kDa以上,建议甲醇浓度5%;10~100kDa,建议甲醇浓度10%;10kDa以下,建议甲醇浓度20%~30%;

5. 电泳时泳道拖尾严重,点样孔样品滞留明显:      ●可能原因是样品处理不充分:          a.裂解处理不够充分。建议降低裂解前的样品浓度,或增加裂解液的比例,使样品充分裂解;          b.上样缓冲液处理不充分。建议对裂解后的样品进行稀释后,再进行上样缓冲液处理;

6. 蛋白条带中间凹陷,两边突起:       ●可能原因是样品盐离子浓度或表面活性剂浓度过高。建议稀释样品或对样品进行透析后,再进行上样缓冲液处理和上样。



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