Western blot 组蛋白提取实验方案 |
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使用优化好的试剂盒，节省时间 为了确保您一次就能完美提取组蛋白，推荐使用我们的组蛋白提取试剂盒 ab113476。 您也可以使用以下使用方案。 收集细胞，并用冰冷 PBS 洗涤两次。可以在 PBS 和后续的缓冲液中补加 5 mM 丁酸钠，以保持组蛋白的乙酰化水平。将细胞重悬于 Triton 提取缓冲液（TEB：含 0.5% Triton X 100 (v/v) 的 PBS、2 mM 苯甲基磺酰氟（PMSF）和 0.02% (w/v) NaN3），细胞密度为每毫升 107 个细胞。轻柔搅拌，冰上裂解细胞 10 分钟。4°C 下以 650 xg 的离心力离心沉淀细胞核 10 分钟。去除并丢弃上清液。用一半体积的 TEB 洗涤细胞核，并按照前述方法进行离心。在 0.2 N HCl 中重悬沉淀，密度为每毫升 4 x 107 个细胞核。4°C 下用酸法提取组蛋白过夜。4℃ 下以 650 xg 的离心力离心样本 10 分钟，以沉淀杂物。保存上清液（含组蛋白），用 2M NaOH 中和盐酸，用量为上清液体积的 1/10。用 Bradford 检测法测定蛋白质含量。等量分装试剂，并置于 -20℃ 下保存。查看 组蛋白提取试剂盒 ab113476 或者我们的其他表观遗传学和western blot 相关实验方案和技术。 |
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