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琼脂糖凝胶电泳设备操作流程及注意事项
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发布时间:2017-09-29
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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作支持物的电泳法,借助琼脂糖凝胶的分子筛作用,核酸片段因其分子量或分子形状不同,电泳移动速度有差异而分离。是基因操作中常用的重要方法。本实验室所用的仪器是Bio-Rad Power PacTM Basic电泳仪。 操作流程 1、凝胶准备:将称好的琼脂糖置三角瓶中,加入电泳缓冲液,微波炉加热熔化琼脂糖,熔化的琼脂糖自然冷却到60~70℃时,加入EB并轻轻混匀。 2、胶床准备:取出胶床和梳子,将梳子垂直插入到胶床的小凹槽内,梳齿底端和床面有1mm的间隙,将胶床放在调整好的水平台上。 3、铺胶:将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶床内,凝胶厚度3~5mm,室温下静置30分钟左右,凝胶固化。将凝胶的胶床置于电泳槽中,并使样品孔位于电场负极。 4、电泳准备:向电泳槽中加入电泳缓冲液,越过凝胶表面即可,轻轻拔出固定在凝胶中的梳子。 5、样品准备:向核酸样品中加入上样缓冲液,用加样器轻轻混匀 6、上样:用加样器吸取样品,轻轻的加入到凝胶的样品孔中。 7、电泳:盖上电泳槽,打开位于仪器右侧的电源开关,设置电泳参数按《V》键后可以“↑”键或“↓”键调节电压值,按《A》键后可以“↑”键或“↓”键调节电流值。在待机/预置状态下按“RUN/STOP”键,进入运行状态,电泳仪输出高压。 8、电泳结束后,按“RUN/STOP”键,返回待机/预置状态,取出凝胶。 9、电泳结果分析:在紫外检测仪直接观察电源条带并摄影记录 10、测定工作全部结束后,检查电极是否干燥;用软布清洁仪器表面。 注意事项 1、凝胶浓度选择根据样品DNA分子大小而定,所以电泳前应对DNA片段大小有粗略的估计; 2、用胶布封闭胶床两端时,要确保严密,以免灌胶时有胶液漏出; 3、用微波炉熔化琼脂糖时,以免突然产生气泡,使琼脂糖溢出来; 4、凝胶冷却至60℃左右,立即铺胶,以防凝固; 5、上样前检查样品孔内是否有气泡,并设法排除; 6、电泳前,确认样品孔位于电场负极; 7、因EB存在,全部操作过程要带防护手套。 上一篇: PCR仪操作流程及注意事项 下一篇: 贝克曼低温高速离心机操作流程 分享到: 相关科室 | 相关医生 | 相关文章 | 相关咨询 | 相关视频 | 相关疾病 |
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