琼脂糖凝胶制备方法及注意事项▶ 琼脂糖凝胶制备方法及注意事项：① 配制缓冲液：配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是 0.5×TBE 或 1×TAE）。② 加入胶粉：根椐制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶或平底烧瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉（总液体量不宜超过锥瓶或烧瓶的 50%容量）。注意事项：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。③ 溶胶：在微波炉中加热溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥瓶或烧瓶，使琼脂糖充分均匀溶解。此操作重复数次，直至琼脂糖完全溶解。注意事项：在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。溶解琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。④ 加入溴化乙锭：使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭溶液（终浓度 0.5 μg/ml），并充分混匀。注意事项：溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时，请戴手套。⑤ 倒胶：将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在 3-5 mm 之间。⑥ 凝胶：在室温下使胶凝固（大约 30 分钟-1 小时），然后放置于电泳槽中进行电泳。注意事项：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2-5天。▶ 琼脂糖的选择：琼脂糖(Agarose)凝胶电泳是检定、分离DNA片段的重要手段，进行琼脂糖凝胶电泳时，琼脂糖的纯度会直接影响DNA的分辨能力及电泳结果的清晰度。如琼脂糖中混有其他糖、盐及蛋白质，会影响DNA在凝胶中的迁移速度以及回收后的DNA片段进行酶促反应时的反应性能。因此，使用高质量的琼脂糖对实验的成功非常重要。