中药水蛭为水蛭科动物蚂蟥（Whitmania pigra）的干燥全体，具有破血通经、逐瘀消癥的功效，主治血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫以及跌打损伤等症[1]。水蛭的炮制方法《伤寒论》中有所记载，大致有净制、切、加辅料和不加辅料制几大类，十几种炮制方法。现代对水蛭的炮制大多采用酒制、滑石粉烫、砂烫等方法。水蛭的主要成分为大分子类化合物，主含蛋白质，含有17种氨基酸，水解氨基酸含量高达49.4%，包括人体必须的8种氨基酸[2]；还含有如水蛭素、肝素、组织胺、吻蛭素、氨基酸等；水蛭中也含有糖脂类、蝶啶类、甾体类和羧酸酯类等多种小分子类物质；此外微量元素主要含有Zn、Mn、Fe、Co、Cr、Se、Mo、Ni等14种微量元素。水蛭具有抗细胞凋亡、抗肿瘤、抗凝、抗血栓、抗炎、抗纤维化等药理作用[3-7]。随着水蛭的人工培养和环境的变化，水蛭的化学成分研究一直是科研工作者的研究热点和难点。所以，为进一步充分利用和开发中药水蛭，丰富水蛭药材的化学成分组成，为水蛭的药效学研究提供科研数据，本实验对中药水蛭的化学成分进行了系统研究，从中分离并鉴定了9个化合物，分别为:吲哚-3-甲酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、3-吲哚-甲醛（2）、腺苷（3）、2-羟基嘌呤核苷（4）、尿嘧啶核苷（5）、腺嘌呤（6）、尿嘧啶（7）、黄嘌呤（8）和2-哌啶酮（9）。所有化合物均为首次从该药材中分离得到。

Bruker AV-300 MHz核磁共振波谱仪（瑞士Bruker公司）; Agilent 6210 LC/MSD TOF质谱仪（美国Agilent公司）; Agilent-1260分析型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）; Agilent-1260制备型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；薄层层析用硅胶GF254薄层预制板（烟台化学工业研究所）；柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂），Sephadex LH-20（Pharmacia公司），ODS柱层析材料（德国Merck公司）；高效液相色谱及质谱仪分析使用试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

水蛭药材于2011年3月购于广东省清平药材市场，由暨南大学药学院周光雄教授鉴定为水蛭科蚂蟥的干燥全体。药材标本（编号20110325）保存于暨南大学中药及天然药物研究所。

干燥的水蛭全体4 kg粉碎后用95%乙醇在80 ℃下回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，得到总浸膏460 g，将总浸膏用适量水混悬后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到相应部位的萃取物。乙酸乙酯萃取物（40 g）经硅胶柱层析，氯仿/甲醇（100:0-1:1）梯度洗脱，经TLC分析合并，得到9个馏分（Fr. 1-6）。馏分Fr. 2（3.2 g）进一步经硅胶柱层析分离及Sephadex LH-20凝胶柱（氯仿-甲醇）分离纯化得到化合物1（9.3 mg）、2（5.3 mg）。馏分Fr. 3（9.7 g）经ODS柱层析，甲醇/水（40:60-100:0）梯度洗脱，TLC检测，得到4个馏分Fr. 3.1~Fr. 3.4。Fr. 3.2经Sephadex LH-20凝胶柱分离纯化得到化合物3（6.3 mg）、4（7.2 mg）。Fr. 3.3（300 mg）经高效液相色谱制备，以甲醇/水（60:40）为流动相，分离纯化得到化合物5（6.5 mg）、6（5.9 mg）、7（8.1 mg）。馏分Fr. 5（3.7 g）经ODS柱层析，甲醇/水（40:60-100:0）梯度洗脱及Sephadex LH-20凝胶柱（氯仿-甲醇）分离纯化得到化合物8（6.6 mg）、9（5.9 mg）。

化合物1：淡黄色油状物。UV（MeOH）λmax: 212、228、282 nm。ESI-MS m/z 346 [M+Na]+, 分子式为C15H17NO7; 1H-NMR（300 MHz, CD3OD）δ: 8.10（1H, m, H-4）, 8.07（1H, s, H-2）, 7.46（1H, m, H-7）, 7.22（1H, m, H-6）, 7.20（1H, m, H-5）, 5.74（1H, d, J=7.9, H-1′）, 3.88（1H, dd, J=12.1, 1.9 Hz, H-6′a）, 3.72（1H, dd, J=12.1, 4.6 Hz, H-6′b）, 3.54（1H, m, H-2′）, 3.53（1H, m, H-3′）, 3.47（1H, m, H-5′）, 3.44（1H, m, H-4′）；13C-NMR（75 MHz，CD3OD）δ:134.4（C-2）, 107.7（C-3）, 122.1（C-4）, 122.9（C-5）, 124.1（C-6）, 113.2（C-7）, 138.4（C-8）, 127.6（C-9）, 165.8（C-10）, 95.5（C-1′）, 78.9（C-2′）, 78.4（C-3′）, 74.3（C-4′）, 71.3（C-5′）, 62.6（C-6′）。以上数据与文献[8]报道对照基本一致，故鉴定化合物1为吲哚-3-甲酸-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2：淡黄色粉末。UV（MeOH）λmax: 208、242、258、296 nm。ESI-MS m/z 146 [M+H]+, 分子式为C9H7NO; 1H-NMR（300 MHz, D2O）δ: 7.64（1H, m, H-5）, 7.51（1H, m, H-8）, 7.27（1H, m, H-2）, 7.21（1H, m, H-7）, 4.09（1H, m, H-1）, 3.57（1H, dd, J=10.4, 4.6 Hz, H-3）, 3.15（1H, m, H-4a）, 2.81（1H, m, H-4b）；13C-NMR（75 MHz, D2O）δ:139.9（C-2）, 120.3（C-3）, 125.2（C-4）, 122.5（C-5）, 123.8（C-6）, 113.3（C-7）, 139.1（C-8）, 125.9（C-9）, 187.6（C-10）。以上数据与文献[9-10]报道对照基本一致，故鉴定化合物2为3-吲哚-甲醛。

化合物3：白色粉末。UV（MeOH）λmax: 206、220、268 nm。ESI-MS m/z 268 [M+H]+, 分子式为C10H13N5O4; 1H-NMR（300 MHz, CD3OD）δ: 8.34（1H, s, H-8）, 8.13（1H, s, H-2）, 7.33（2H, s, NH2-6）, 5.87（1H, d, J=6.2 Hz, H-1′）, 5.48（1H, m, OH-2′）, 5.42（1H, m, OH-5′）, 5.23（1H, m, OH-3′）, 4.60（1H, m, 2′）, 4.14（1H, m, 3′）, 3.96（1H, m, 4′a）, 3.67（1H, m, 5′a）, 3.55（1H, m, 5′b）；13C-NMR（75 MHz, CD3OD）δ:152.4（C-2）, 149.0（C-4）, 119.3（C-5）, 156.1（C-6）, 139.9（C-8）, 87.9（C-1′）, 73.4（C-2′）, 70.6（C-3′）, 85.9（C-4′）, 60.7（C-5′）。以上数据与文献[11]报道对照基本一致，故鉴定化合物3为腺苷。

化合物4：白色粉末。UV（MeOH）λmax: 206、248 nm。ESI-MS m/z 291 [M+Na]+, 分子式为C10H12N4O5; 1H-NMR（300 MHz, CD3OD）δ: 8.29（1H, s, H-8）, 8.18（1H, s, H-6）, 6.06（1H, d, J=5.8 Hz, H-1′）, 4.77（1H, dd, J=5.8, 5.2 Hz, H-2′），4.43（1H, dd, J=5.2, 3.8 Hz, H-3′）, 4.28（1H, m, H-4′）, 3.93（1H, dd, J=12.8, 2.9 Hz, H-5′a）, 3.80（1H, dd, J=12.8, 3.9 Hz, H-5′b）；13C-NMR（75 MHz, CD3OD）δ: 160.2（C-2）, 148.5（C-4）, 124.1（C-5）, 147.4（C-6）, 139.9（C-8）, 88.3（C-1′）, 70.4（C-2′）, 73.9（C-3′）, 85.5（C-4′）, 61.3（C-5′）。以上数据与文献[12]报道对照基本一致，故鉴定化合物4为2-羟基嘌呤核苷。

化合物5：白色粉末。UV（MeOH）λmax: 208、262 nm。ESI-MS m/z 267 [M+Na]+，分子式为C9H12N2O6; 1H-NMR（300 MHz, CD3OD）δ: 7.86（1H, d, J=8.1 Hz, H-6）, 5.89（1H, d, J=5.4 Hz, H-1′）, 5.87（1H, d, J=8.1, H-5）, 4.34（1H, dd, J = 5.4, 4.6 Hz, H-2′）, 4.22（1H, t, J=5.4，5.4 Hz, H-3′）, 4.12（1H, m, H-4′）, 3.91（1H, dd, J=12.8, 2.9 Hz, H-5′a）, 3.80（1H, dd, J=12.8, 4.3 Hz, H-5′b）；13C-NMR（75 MHz, CD3OD）δ:154.7（C-2）, 166.3（C-4）, 102.2（C-5）, 141.7（C-6）, 89.3（C-1′）, 73.6（C-2′）, 69.3（C-3′）, 84.1（C-4′）, 60.7（C-5′）。以上数据与文献[13]报道对照基本一致，故鉴定化合物5为尿嘧啶核苷。

化合物6：白色粉末。UV（MeOH）λmax: 206、260 nm。ESI-MS m/z 136 [M+H]+, 分子式为C5H5N5; 1H-NMR（300 MHz, D2O）δ: 7.99（1H, s, H-2）, 7.92（1H, s, H-8）；13C-NMR（75 MHz, D2O）δ:154.0（C-2）, 150.4（C-4）, 118.1（C-5）, 155.2（C-6）, 147.4（C-8）。以上数据与文献[14]报道对照基本一致，故鉴定化合物6为腺嘌呤。

化合物7：白色粉末。UV（MeOH）λmax: 206、258 nm。1H-NMR（300 MHz, DMSO-d6）δ: 11.00（1H, s, H-3）, 10.80（1H, s, H-1）, 7.38（1H, d, J=6.9 Hz, H-6）, 5.45（1H, d, J=6.9Hz, H-5）；13C-NMR（75 MHz, DMSO-d6）δ:151.6（C-2）, 164.4（C-4）, 100.3（C-5）, 142.2（C-6）。以上数据与文献[15]报道对照基本一致，故鉴定化合物7为尿嘧啶。

化合物8：淡黄色粉末。UV（MeOH）λmax: 204、262 nm。ESI-MS m/z 151 [M-H]+, 分子式为C5H4N4O2; 1H-NMR（300 MHz, DMSO-d6）δ: 7.82（1H, s, H-8）; 13C-NMR（75 MHz, DMSO-d6）δ:151.8（C-2）, 149.4（C-4）, 107.9（C-5）, 156.0（C-6）, 140.8（C-8）。以上数据与文献[16]报道对照基本一致，故鉴定化合物8为黄嘌呤。

化合物9：淡黄色油状物。UV（MeOH）λmax：206 nm。ESI-MS m/z 100 [M+H]+, 分子式为C5H9NO; 1H-NMR（300 MHz, CD3OD）δ: 3.27（2H, m, H-6）, 2.30（2H, m, H-3）, 1.79（2H, m, H-4）, 1.76（2H, m, H-5）；13C-NMR（75 MHz, CD3OD）δ:175.1（C-2）, 32.1（C-3）, 21.8（C-4）, 23.2（C-5）, 43.1（C-6）。以上数据与文献[17]报道对照基本一致，故鉴定化合物9为2-哌啶酮。