原标题：罗切斯特大学Michael Telias团队认为神经分化实验都需要详细校准、优化和定制

直接分化导致分化因子（例如：neurogenin-2、NeuroD1等）的过度表达。这种人工过度表达可以是持续的或暂时的，可逆的或不可逆的。持久的基因操纵是通过确保表达盒整合到细胞基因组或作为稳定的核上位体的方法实现的；而体外基因表达的瞬时调控可以通过几种不同的方法通过细胞转染实现。如果使用组成活性启动子，持续的基因表达可能是不可逆的，如果表达盒包含调节性开/关开关，例如Tet-On表达系统，则是可逆的。后者需要在两种抗生素的相对高浓度下维持细胞培养，一种用于转染选择，另一种用于基因表达的时间调节，这可能导致细胞增殖和神经元产量降低。如果使用病毒载体进行基因操作，则应在每个方案中考虑每个载体的分子和遗传特征，包括血清型、嗜性、最大有效载荷大小、感染率等。无论采用何种递送方法，任何有望整合到细胞基因组中的合成DNA结构都可能产生意外突变和染色体异常，从而带来未知混杂因素的风险。如果使用物理持续时间有限的遗传物质，如mRNA或siRNAs，多能干细胞的直接遗传操作可以暂时实现；但是，使用瞬时表达的RNA实现长期和强健的神经元分化并不真正可行，除非能够以高均匀性和再现性的方式提供多个或连续剂量。

来自罗切斯特大学Michael Telias团队概述，所有类型的多能干细胞，包括幼稚和预处理的胚胎干细胞，以及基因重组的体细胞，都可以通过化学或基因方法分化为神经前体、神经元和胶质细胞。“化学”或间接分化用几种特定分子（包括小分子抑制剂、肽和其他生物制剂）处理细胞，以鼓励神经分化，阻止非神经分化。根据方案的不同，获得成熟和有功能的神经元可能需要数周到数月的时间，通常在神经元和神经胶质细胞的发育过程中结束。“遗传”或直接分化是诱导一个或多个基因过度表达，迫使未分化细胞转化为神经元。只需几天时间（通常在15到30天之间）就可以产生功能神经元的同质培养物，具有高度的细胞同质性。

文章在《中国神经再生研究（英文版）》杂志2023年6 月 6 期发表。

文章来源：Telias M (2023) Neural differentiation protocols: how to choose the correct approach. Neural Regen Res 18(6):1273-1274. 返回搜狐，查看更多

责任编辑：