核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要，因此，对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。本文简单的回顾学习一下核酸鉴定的方法。

核酸鉴定包括：浓度/纯度鉴定+完整性鉴定

1.浓度/纯度鉴定

（1）紫外分光光度计：

原理：由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线，其吸收高峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。

由于核苷酸最大吸收波长为260nm,根据朗伯-比尔定律可计算出在波长260nm的紫外线下，1个OD值的光密度大约相当于50µg/ml的双链DNA， 40µg/ml的单链RNA。紫外分光光度法只适用于测定浓度大于0.25µg/ml的核酸溶液。

计算公式:

dsDNA（µg/µl）=OD260x50x稀释倍数/1000

RNA（µg/µl）=OD260x40x稀释倍数/1000

纯净的DNA OD260/OD280=1.8，制备的样品DNA比值在1.7-1.9，若洗脱时不使用洗脱缓冲液而使用去离子水，比值会偏低，因为PH值和离子存在会影响光的吸收值。

当OD260/OD280< 1.7，表明蛋白质含量较高，可用利用酚、氯仿、异戊醇抽提，再用乙醇沉淀去除。

当OD260/OD280> 2.0，表明RNA含量较高。可用RNaseA消化后再进行纯化。

OD260/OD230的值，一般不小于2.0，若小于2.0，表明有碳水化合物、盐类或有机试剂污染。

实例：基因组DNA提取得率和纯度

FOREGENE Soil DNA Isolation Kit( DE-05511) 

特点：

简便—无需研磨、无需低温操作。

快速—90min内完成操作。

安全—无需有机试剂。

本试剂盒处理各种来源土壤样本，获得的基因组DNA量和纯度见下表：

纯净的RNA OD260/OD280=2.0，制备的样品DNA比值在1.8-2.1 ，OD260/OD280比值会受到所用溶液PH值的影响，例如，纯化的RNA在PH=7.5的缓冲液中OD260/OD280读数在1.9-2.1之间，而在中性的水溶液中比值会偏低，可能只有1.8-2.0，这并不意味着RNA的质量变差，所以还需要做电泳检测。

OD260/OD280