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作者：

栗亚云

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摘要：

肥胖已经严重危害到人类的健康,被WHO明确认定为全球最大慢性疾病.每年至少有340万人死于超重和肥胖.面对如此严峻的形势,在过去几十年中,研究人员对肥胖的治疗进行了大量研究,结果表明通过药物抑制胰脂肪酶(Pancreatic lipase, PL)活性,阻止脂肪水解吸收成为治疗肥胖最有效的方法之一,此类药物仅有奥利司他,但该药物仍有明显的副作用,因而开发出安全,无毒副作用,可长期服用的PL抑制剂类减肥药物成为研究的热点.当前,从资源丰富的天然产物中筛选PL抑制剂是最有效的手段之一,但利用传统筛选方法进行筛选存在许多的缺点,因此人们研究出了利用固定化酶从天然植物中筛选能与之进行特异性结合的化合物的方法,该方法克服了传统筛选方法的缺陷,减少了天然产物分离和活性筛选的盲目性,节省了时间,极大地提高了筛选的命中率.本实验室前期研究发现连翘叶提取物对PL有较好的抑制作用,体内实验证明其具有减轻肥胖大鼠体重,降低总脂含量和血清中甘油三酯的作用,但有效成分还不确定.本论文在前期实验研究的基础上,首先合成了磁珠固定化胰脂肪酶,然后利用固定化酶对连翘叶中的PL抑制剂进行了系统筛选,最后又对其它几种天然植物抑酶作用进行了初步研究.主要研究内容和结果如下:1.以羧基磁珠为载体,通过磁珠上羧基与PL上氨基共价结合形成酰胺键而合成了固定化酶,并利用红外光谱进行了结构表征,然后利用阳性抑制剂橙皮苷对建立的固定化酶筛选模型进行了验证.结果表明橙皮苷可以特异性结合到固定化酶上,说明所建立的固定化酶筛选模型可用于筛选天然植物提取物中能与PL发生特异性结合的化合物.2.以95%乙醇提取连翘叶,并用石油醚萃取法去除叶绿素,然后进行系统萃取,最后测定了各萃取组分对PL的抑制作用.结果显示剩余沉淀组分对PL抑制作用最好,1.5 mg/mL时抑制率为81.48%,因此选用该组分作为连翘叶进行固定化酶筛选的样品.此外,还发现了利用浊点萃取法结合超声波可高效提取叶绿素的新方法.3.利用固定化酶筛选模型对连翘叶最高抑酶活性组分中的PL抑制剂进行了系统筛选,并对筛选出的化合物进行了结构鉴定和抑酶作用测定.最终筛选出9个与PL有作用的化合物,包括3个黄酮类(芦丁,橙皮苷,山奈酚-3-O-芸香糖苷),2个多酚类(绿原酸,咖啡酸),2个木脂素类(连翘苷,牛蒡子苷元)及2个苯乙醇类(连翘酯苷A及其同分异构体).在确定结构的8个化合物中,连翘苷对PL有促进作用,其余均为抑制作用,其中山奈酚-3-O-芸香糖苷抑酶作用最好(IC50: 2.9±0.5 μmol/L).抑制类型有竞争性,非竞争性和反竞争性抑制.4.测定了11种天然植物对PL的抑制作用,并利用固定化酶筛选模型对决明子氯仿和正丁醇萃取组分中的PL抑制剂进行了初步筛选研究.最终从决明子氯仿萃取组分中筛选出11个可能与PL有作用的化合物.

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关键词：

连翘叶 决明子 胰脂肪酶抑制剂 筛选方法 肥胖 天然植物 固定化酶

学位级别：

硕士

学位年度：

2015

被引量：

5