【科研】Michaelis–Menten 曲线(米氏曲线)中反应速率的计算 |
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参考文献:Standardized assays for determining the catalytic activity and kinetics of peroxidase-like nanozymes | Nature Protocols SCI-Hub链接: https://sci-hub.se/10.1038/s41596-018-0001-1 科研需要,需要绘制所制备纳米酶的Michaelis–Menten 曲线,身边没有师兄师姐做过,只能自己摸索,国内网站上的资料不是太多,很难找到成体系的文章,同时也看到网络上有很多小伙伴遇到和我一样的困惑,不知道Michaelis–Menten 曲线的纵坐标 ʋ(反应速率)是如何得到的,所以在这里记录一下我思考后的理解,如有不对请指教。 根据 朗伯比尔定律A = εlc A:吸光度(由紫外分光光度计可得), ε:摩尔吸光系数(L/(mol·cm) 即/M/cm),l:光路长度(cm)(我的理解是比色皿的宽度?不对请指教),c:吸光物质的浓度(mol/L) 附常用显色剂摩尔吸收系数: TMBε~652nm =39000 /M/cmOPDε~417nm =16700 /M/cmABTSε~420nm = 36000/M/cmA,ε,l均为已知量,则 c = A/εl, 则反应速度为 ʋ =△c/△t = (△A/εl)/△t = △A/(εl*△t) = △A/△t *(1/εl)。 若t为min,则ʋ的单位在这里为M/min,可根据数据的实际情况,将数据×10^6,将单位改成 µM/min 其中△A/△t可由该浓度下反应最开始吸光度和时间成线性的部分的斜率所得,如下图所示: 最后,根据不同反应底物浓度对应的ʋ,得到Michaelis–Menten 曲线 |
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