纸层析法实验步骤

前言

纸层析法

纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国

植物学家

tswett

发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。

现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是

一种以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有

机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一

端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不

同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定

斑点位置。根据组分移动距离（

rf

值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分

点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。

纸层析法（

paper chromatography

）就是生物化学上拆分、鉴别氨基酸混合物的常用

技术，可以用作蛋白质的氨基酸成分的定性鉴别和定量测定；也就是定性或定量测定多肽、

核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种拆分分析工具。纸层析法就是用滤

纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有

机溶溶剂是流动相。

在环境分析测试中，有时用纸层析法拆分试样组分，它用作一些精度相对较低的分析，

如

3

，

4-

苯并芘。但不如

gc

、

hplc

应用领域广泛。在

做叶绿体色素分离时用到

,

将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）

混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下

4

条

色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。

纸层析法通常用作叶绿体中色素的拆分，叶绿体中色素主要包含胡萝卜素、叶黄素、

叶绿素

a

、叶绿素

b

，它们在层析液中的溶解度相同，溶解度小的随层析液在滤纸上蔓延

地慢，反之则快；含量较多者色素拎也较宽。最后在滤纸上遗留下

4

条色素拎，所以利用

纸层析法

能够确切地将叶绿体中的色素拆分。

氨基酸

氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行

业。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为

2l

世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求

量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年的产量为万

吨，而需求总量是万吨。我国自

20

世纪

60

年代起，氨基酸的应用在食品工业占

61

％，在

饮料工业占

30

％，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用

的比例逐年增加。

氨基酸在人类生活的很多方面都有著应用领域：

    (1)

在食品行业的应用