目 录

《药理学》实验课程简介：

药理学是建立在生理学、病理学、病理生理学、解剖学、生物化学等学科基础上的一门学科。药理学实验课以动物为研究对象，制作与药物主治功效一致的动物模型，采用一定的实验技术，研究药物的作用（包括毒理学作用）及其机制。所以，药理学实验课目的在于：通过实验使学生能够很好地掌握药理学实验的基本方法，掌握动物的选择、模型的制作等研究思路，从而掌握和验证药理学的重要理论和知识，药理学实验课是了解、掌握和获得药理学基本概念和知识的科学途径，验证药理学中的重要理论的重要手段，是学生获取知识的新手段，为培养学生形成初步的科研思路的重要课程。

实验守则及要求：

1. 实验前

1.1 仔细阅读实验指导，了解实验目的、实验原理、操作方法和步骤；

1.2 了解所用动物的等级、品系、特点及动物的选择依据；

1.3 了解动物模型制作的原理及制作方法；

1.4 了解实验药物的药理作用及其机制和应用范围；

1.5 结合有关生理学、病理生理学、病理学、解剖学、生物化学、药理学的理论知识，预测动物模型的行为学、病理学、病理生理学等以及给药后实验动物可能出现的变化情况。

2. 实验时

2.1 正确使用各种实验器材，正确存放，正确安装、调控和操作；

2.2 正确捉放动物，善待动物，严禁虐待动物或嬉戏动物；

2.3 严格按照实验讲义上的操作步骤进行操作，做到准确计算实验剂量所需的药量，准确称量，正确使用注射器和手术器械，防止发生意外；

2.4 仔细认真地观察从制作模型和给药后实验动物出现的现象，并严格准确地进行记录；

2.5节约使用实验耗材和药品；

2.6 实验服穿戴整齐，注意个人和实验室卫生。

3. 实验后

3.1整理实验数据，统计实验结果，并对实验结果进行和讨论，书写出实验报告，并保存好原始记录；

3.2将存活或死亡的动物分别送到指定地点，妥善处理；

3.3及时清洗实验器材，打扫实验室卫生；

3.4 按照要求洗手，检查水电门窗安全，方可离开实验室。

实验一   药理学实验基础知识与常用动物捉拿、给药

实验二   不同给药途径对药物作用的影响

实验三   药物对离体肠系膜动脉环的作用

实验四   药物半数致死量LD50和半数有效量ED50的测定

实验五   肝功能损伤对药物作用的影响

实验六   醋酸泼尼松抗炎作用

实验七   肝素的抗凝血作用

实验八   乙酰水杨酸的镇痛作用

实验九   药物的祛痰作用考察

实验十   维拉帕米对抗心律失常作用

实验一  药理学实验基础知识与常用动物捉拿、给药

一、实验目的

1. 掌握药理学实验的基本方法；

2. 练习并掌握常用实验动物的选择、应用等基本知识以及动物的捉拿、给药及处死方法。

二、实验材料、仪器和试剂

小鼠、大鼠、家兔；生理盐水、苦味酸（标记用）；注射器、灌胃针头。

三、实验方法及步骤

1.讲解实验动物的分类、选择、操作要点等基础知识

2.实验动物的基本操作技术演示

  （1）实验动物的捉拿

      （2）给药方法   包括灌胃、腹腔注射、皮下注射、肌肉注射、尾静脉注射

      （3）编号  

      （4）处死

3. 学生练习

四、注意事项

捉拿小鼠时，捉拿的手法一定要正确，避免被小鼠咬伤；

实验二 不同给药途径对药物作用的影响

一、实验目的

1. 观察两种不同给药途径对MgSO4药理作用的影响。

2. 学习并掌握小鼠灌胃、腹腔注射的方法。

3. 学习并掌握家兔灌胃和耳缘静脉注射的两种给药方法。

二、实验原理

给药途径不同，药物吸收的速度和程度就有差别，从而使血药浓度的高低不同，药物作用的快慢及强弱不同，甚至药理作用的性质发生改变。硫酸镁是一个典型的不同给药途径产生不同药理作用的药物，其口服在胃肠道形成高渗透压，使肠腔外水份向肠腔内渗透，出现泻下作用。静脉注射硫酸镁主要作用有：抑制中枢神经系统、扩张血管降低血压及肌松作用等。

三、实验材料、仪器和试剂

1、动物：小鼠，家兔。

2、药品： Mg SO4、CaCl2、生理盐水、戊巴比妥钠、肝素。

3、器材：注射器、灌胃针、鼠笼、天平、家兔灌胃器、兔笼、家兔手术台、二导记录仪、动脉夹、动脉插管、导尿管等。

四、实验方法及步骤

小鼠：

1. 分组称重后标记，2只腹腔注射MgSO4 0.2mL/10g，出现明显症状时ip CaCl2 0.2mL/10g，2只ip等容量的生理盐水；

2. 2只灌服（ig）MgSO4 0.2mL/10g，2只ig等容量的生理盐水。观察并记录小鼠出现的症状。

家兔：

1. 取正常家兔称重，耳缘静脉缓慢注射 硫酸镁溶液2.5 mL/kg，观察其症状。出现中毒症状后，立即用氯化钙溶液iv 5 mL/kg抢救；

2. 取正常家兔称重，ig相同剂量的硫酸镁溶液，再灌50 mL生理盐水，放于兔笼中观察症状；

3. 取正常家兔，称重，用戊巴比妥钠耳缘静脉iv，进行动脉插管，观察静脉注射硫酸镁溶液前后血压的变化；

4. 取正常家兔，称重，用戊巴比妥钠麻醉，用硫酸镁溶液灌胃，观察并记录家兔出现的症状。

五、注意事项

1. 规范给药实验基本操作；应排除由于灌胃操作失误所致的小鼠死亡现象；

2. 注射钙剂解救要缓慢，以防止引起室颤；

3. 在全麻状况下进行灌胃，可观察到动物有镁离子中毒的症状，这是由于大约有20％的镁离子在肠道被吸收，加深了中枢抑制，所以不能在中枢抑制的情况下用硫酸镁导泄。

六、思考题

给药途径与药物作用的关系及其重要意义。

实验三 药物对离体肠系膜动脉环的作用

一、实验目的

掌握离体肠系膜动脉血管的取材方法，学习离体血管的实验方法以及药物对离体血管的作用。

二、实验原理

肠系膜动脉血管平滑肌细胞上有α和β肾上腺素受体，正常生理状态下，儿茶酚胺类神经递质作用于肾上腺素受体维持心脑血管系统的正常功能，研究资料证明肾上腺素受体的表达变化在心脑血管的发病机制中起着重要的作用。血管内皮可释放NO，舒张血管，在维持血管的正常功能方面具有重要的作用，血管内皮功能失调可导致动脉粥样硬化、心脑缺血等多种疾病。

三、实验材料、仪器和试剂

1、动物：大鼠

2、药品：苯肾上腺素（PE）、肾上腺素（AD）、沙丁胺醇（SAL）、乙酰胆碱（Ach）、5-羟色胺（5-HT）、硝普钠（SNP）、β2受体拮抗剂。

3、器材：BL-420生物机能系统、张力换能器、离体实验装置、手术器械、注射器、电子天平、体视显微镜。

四、实验方法及步骤

1. 血管环的制备：断颈处死动物，迅速开胸，分离、摘取胸主动脉（或肠系膜动脉），置于冷的氧饱和的K-H缓冲液中，在体视显微镜下，小心剔除血管周围结缔组织及脂肪组织，分离出血管，避免损伤血管内皮。截取2-3 mm的血管环（根据情况截取血管环，但每个血管环的长度应该一致），将其悬挂于两个不锈钢挂钩上，一端固定于浴槽，另一端连接张力换能器，并与BL-420系统相连、记录血管张力变化。血管环置于盛有5 mL K-H液的器官浴槽中，并持续充以95% O2和 5% CO2的混合气体，调节气流速度为1-2个泡/秒，调节基础张力至5 mN，37℃恒温，每隔15 min更换浴槽中的K-H液一次，共平衡60-120 min。

用0.2%的triton-100灌注血管10s去除血管内皮，用Ach检验内皮细胞功能，血管舒张率小于10%则为内皮完全去除，大于75%则为内皮完整。

2. 对PE收缩血管量效曲线的影响  去内皮动脉环，用60 mM KCl收缩后，选取两次血管收缩最大幅度在10%范围内的血管环，冲洗并平衡l.0 h，向浴槽中递增加入PE溶液，观察并记录血管环收缩情况。

3. 对AD收缩血管量效曲线的影响  去内皮动脉环，用60 mM KCl收缩两次并平衡l.0 h，向浴槽中加入或不加入10 mM β2受体拮抗剂ICI 118551后，递增加入AD溶液，观察并记录血管环收缩情况。

4. 对SAL舒张血管量效曲线的影响  去内皮动脉环，用10-6 M PE收缩血管，待达到平台后，向浴槽中加入或不加入10 mM β2受体拮抗剂ICI 118551后，递增加入SAL溶液，观察并记录血管环舒张情况。

5. 对Ach和SNP舒张血管量效曲线的影响  内皮完整的动脉环，用60 mM KCl或10-6 M PE收缩血管，选取两次血管收缩最大幅度在10%范围内的血管环，向浴槽中递增加入Ach或SNP溶液，记录血管环的舒张情况。

五、注意事项

1. 制备主动脉环时，放入冷冻的饱和以95% O2和 5% CO2的混合气体饱和的K-H液中，请勿过度牵拉主动脉。

2. 平衡主动脉环60-120 min时，通入的气体不得扰动连接张力换能器的线。

3. 平衡主动脉环时，观察并随时保持稳定的前负荷。

4. 加药时不要触及连接张力换能器的线。

5. 注意给药的浓度：加入的母液浓度，要与终浓度区别。

实验四 药物半数致死量LD50和半数有效量ED50的测定

一、实验目的

学习LD50和ED50的测定方法，掌握LD50、ED50的计算方法，理解其药理学意义。

二、实验原理

ED50是标志药物效价的一个参数，它是指在一定的实验条件下，一群动物用药后，约半数动物出现疗效的剂量，而LD50则是半数动物出现死亡的剂量。为了对药物的毒性和疗效有一个较全面的考虑，可计算药物的治疗指数。治疗指数= LD50/ ED50，此比值越大，就越安全。

三、实验材料、仪器和试剂

1ml注射器，小鼠笼，电子秤，戊巴比妥钠溶液，小鼠。

四、实验方法及步骤

（一）ED50的测定

   1.取小鼠40只，雌雄各半，随机分成4组，每组10只。

   2.各组戊巴比妥钠剂量分别为21mg/kg、26mg/kg、32mg/kg、40mg/kg，每鼠腹腔注射药物容量0.1ml/10g。

   3. 给药后立即记下时间，以小鼠15分钟内翻正反射消失，作为阳性反应指标。

（二）LD50的测定

   方法同ED50的测定，戊巴比妥钠剂量分别为77mg/kg,，96mg/kg，120mg/kg和150mg/kg。以24小时内死亡（呼吸停止）作为指标，记下死亡数，整个实验过程中，小白鼠按正常生活条件养一天。结果记录及计算：

表1 戊巴比妥钠ED50测定结果

组别

动物数

（只）

  剂量

（mg/kg）

翻正反射消失

动物数（只）

 有效率

1

10

 21

2

10

 26

3

10

 32

4

10

 40

表2 戊巴比妥钠LD50测定结果

组别

动物数

（只）

剂量

（mg/kg）

翻正反射消失

动物数（只）

有效率

1

10

77

2

10

96

3

10

120

4

10

150

以上结果按寇氏法公式计算：

公式：ED50=lg-1[Xm-i (∑pi-0.5)]

     LD50=lg-1[Xm-i (∑pi-0.5)]

上式中：Xm：最大剂量的对数

       i：相邻两组剂量对数值之差（取绝对值）

       ∑pi：各组反应率（即有效率或死亡率）的总和。

五、注意事项

1. 各组剂量千万不能搞错，剂量要准确;

2. 药物推注速度要慢，以免引起呼吸抑制。

六、思考题

1. 什么是LD50、ED50？测定其有何意义？

2. 什么是治疗指数？如何测定和计算？

实验五 肝功能损伤对药物作用的影响

一、实验目的

1. 观察肝功能损害对巴比妥类药物作用的影响。

2. 了解肝损伤模型的建立方法。

二、实验原理

戊巴比妥钠具有镇静、催眠和麻醉作用。四氯化碳对肝脏有较大毒性，是建立中毒性肝损害动物模型的常用工具药，可借以观察肝功能损害对药物作用的影响。肝功能状态直接影响其药理作用的强弱和维持时间的长短。肝损伤时，药物在体内的Cmax增加，t1/2β延长，药效增强。

三、实验材料、仪器和试剂

1．动物：小鼠，模型组提前注射CCl4溶液造模，对照组注射生理盐水(NS)。

2．药品：戊巴比妥钠溶液、CCl4、生理盐水。

3．器械：天平、1mL注射器。

四、实验方法及步骤

1. 取体重相近的对照组及肝损伤模型组小鼠称重，标记。分别由腹腔注射戊巴比妥钠溶液0.15 mL/10g，记录并比较两组小白鼠睡眠潜伏期和睡眠持续时间，并汇总全班各组的结果进行统计；

2. 观察的其他指标：活动情况，翻正反射，呼吸深浅及频率；

3. 处死后解剖小鼠，观察肝脏有何不同；

4. 睡眠潜伏期和睡眠持续时间用秩和检验进行检验：根据实验结果，并应用相关药理学知识进行讨论。

表1 肝功能损伤对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠作用的影响

体重(g)

药量(ml)

睡眠潜伏期

睡眠持续时间

NS对照组

NS对照组

NS对照组

CCl4组

CCl4组

CCl4组

五、注意事项

1．试验前建立肝损伤模型。

2．在建立肝损伤时注意四氯化碳的剂量，以免剂量过大导致小鼠死亡。

3．戊巴比妥钠ip给药。

六、思考题

1．肝脏不同状态下对巴比妥类药物有何影响？

2．当肝脏机能障碍时，对药物作用有什么影响？临床用药时，对有严重肝脏疾病的患者应注意什么问题？

实验六 醋酸泼尼松抗炎作用

一、实验目的

观察并验证醋酸泼尼松的抗炎作用。

二、实验原理

二甲苯是一个无色透明液体物质，毒性比较大，其作用机理是它可增加毛细血管的通透性，渗入组织的液体增多，肉眼看到红肿现象。醋酸泼尼松能抑制炎症细胞在炎症部位的集聚，并能抑制巨噬细胞的吞噬作用、溶酶体酶的释放以及炎症介质的合成和释放。

三、实验材料、仪器和试剂

小鼠，打孔器、二甲苯、醋酸泼尼松溶液、生理盐水。

四、实验方法及步骤

将小鼠分成2组，第1组给药组ig给醋酸泼尼松溶液0.2 mL/10g，第2组为对照组 ig 0.2 mL/10g生理盐水作对照，给药后在实验小鼠的耳部涂布二甲苯。左耳不作任何处理。后将动物麻醉处死，用打孔器打下圆耳片，称重并计算肿胀度及肿胀抑制率。制表记录小组结果及全班结果，应用Graphpad prism软件处理数据，肿胀度用Student’t检验进行检验，将得到的平均值和标准偏差以形式填入表，比较醋酸泼尼松对小鼠耳肿胀度的影响。

表1 醋酸泼尼松对小鼠耳肿胀度的影响（全班统计结果）

组别

动物数

肿胀度（mg）

肿胀抑制率

对照组

醋酸泼尼松组

注：与对照组比较，*P