实时荧光PCR:内标定量与外标定量的差异 |
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实时荧光定量PCR中样本的浓度对数值(log 值)与扩增曲线 Ct 值呈线性关系, Ct 值越小,浓度越高。根据所采用的定量数学模型的差别,有外标定量法(外标法)和内标定量法(内标法)两种方法。
外标定量:使用一系列已知浓度外定量标准品(一般4-5个浓度梯度)与待测标本进行测定,通过标准品浓度的 log 值( y )和扩增的 Ct 值( x )间线性比例关系,可得到待测样本浓度值和 Ct 值的关系公式,简单理解即 y=Kx+B ,K 和 B 值需由外标准曲线获取,样本扩增 Ct 值( x )代入公式中即可算出待测样本的浓度值( y )。
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