抗原、抗体、血清等知识分享

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抗原、抗体、血清等知识分享

2024-07-11 16:42| 来源: 网络整理| 查看: 265

抗体基因重排/抗原抗体

抗体的L链是由C、V、J三个基因簇编码的,H链由C、V、D、J四个基因簇编码的。V是编码可变区,有300个种类;D编码高变区,有15 ~ 20个种类;J编码连接V、C的结合区,有4~5个种类;C编码恒定区,仅有一种。这些外显子通过多种多样的重排,所合成出的肽链,还要再进一步进行L和H链组合,这样最后生成的抗体种类就非常多了。抗体基因重排是发生在淋巴细胞分化的时候。

单克隆抗体/抗原抗体

(monoclonal antibody,McAb)克隆选择学说:淋巴细胞在与抗原接触前就已经存在多种多样的与抗原专一性结合的受体,一种细胞带一种受体,进入机体的抗原选择性的结合其中的个别淋巴细胞,使之活化,增殖产生大量带有同样受体的细胞群,分泌同样的抗体。 bio.jewelove.net 当抗原进入体内,在机体中就会诱导出针对不同抗原决定簇的多种抗体,如果要把这些抗体一一分开,用现有的生物化学或物理化学方法是根本办不到的。1975年科勒(Koehller)和米尔斯坦(Milstein)将小鼠免疫细胞与肿瘤细胞融合,培养出既能迅速生长繁殖又可分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。从而获得针对某一特殊抗原决定簇的单克隆抗体。

抗体的功能/抗原抗体

抗体的主要功能是与抗原(包括外来的和自身的)相结合,从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物,中和它们所释放的毒素或清除某些自身抗原,使机体保持正常平衡,但有时也会对机体造成病理性损害,如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生,对人体可造成危害。

抗体规律/抗原抗体

(1)初次反应产生抗体:当抗原第一次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗体,且抗体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。

(2)再次反应产生抗体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗体量略为降低。随后,抗体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。

(3)回忆反应产生抗体:由抗原刺激机体产生的抗体,经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原,可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同,则称为特异性回忆反应;若与初次反应不同,则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的,短时间内即很快下降。

抗原—抗体反应

antigen-antibody reaction,是抗原和对应抗体在一定条件下特异结合形成可逆性抗原-抗体复合物的过程。由于抗原的物理性状、抗体的特点、参与反应的介质和实验条件的不同,抗原-抗体反应可分为凝集反应、沉淀反应、补体结合反应或嗜细胞反应等,这些反应已成为疾病诊断、病原微生物鉴定、流行病学调查以及科学研究工作广泛应用的手段。

抗原-抗体反应(antigen-antibody reaction)是抗原和对应抗体在一定条件下特异结合形成可逆性抗原-抗体复合物的过程。例如一个日常生活的例子,感冒,抗原—抗体的对抗反应。抗原-抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子上的抗原决定簇相互吸引、以及多种分子间的引力参与发生的。这种反应没有化学键的形成。抗原-抗体反应的强度是以免疫球蛋白的Fab段与抗原决定簇之间平衡反应的结合强度(亲和力)和整个免疫球蛋白分子与抗原之间反应的结合强度(亲和力)表示的。抗原-抗体复合物的溶解度取决于抗原-抗体的比例。由于抗原的物理性状、抗体的特点、参与反应的介质和实验条件的不同,抗原-抗体反应可分为凝集反应、沉淀反应、补体结合反应或嗜细胞反应等,这些反应已成为疾病诊断、病原微生物鉴定、流行病学调查以及科学研究工作广泛应用的手段。

反应机制

抗体都是蛋白质(免疫球蛋白)。多数抗原也是蛋白质,少数为多糖、类脂、核酸等物质。以水为分散媒的胶体中,在一定的酸碱度下,分散相分子中的极性基(如羧基、氨基、肽基等)发生电离而使胶体粒子带电荷,同种粒子所带电荷相同,彼此互相排斥。这些极性基团与水有很强的亲和力,使胶体粒子外围构成水层成为亲水胶体,因而胶体粒子能均匀地分布在溶液中。

如果抗原-抗体发生特异性结合,就不能与周围水分子结合,而构成憎水胶体。憎水胶体在溶液中的稳定性取决于胶体离子的表面电荷。若在溶液中加入一定量的电解质,则可中和胶体离子表面上的电荷,促使粒子相互吸引而出现凝集反应或沉淀反应等。此外,还有库伦吸引力、范德瓦耳斯力、氢键结合作用、疏水相互作用等分子间引力参与和促进抗原-抗体反应。

反应规律

抗原与抗体反应具有高度的特异性。这一反应是分子表面的结合,虽然相当稳定,但因抗原-抗体本身未受到破坏,它们仍可分离,因此,反应是可逆的。此外,抗原分子与抗体分子的结合有一定的比例。

一般来说,抗原是多价的,抗体是双价的,因而一个抗体分子可结合两个抗原分子,而一个抗原分子可结合多个抗体。所以,在比例适合时它们可形成高度交联的抗原-抗体大分子复合物,沉淀下降。抗体过多或抗原过多,都不能形成高度交联的抗原-抗体大分子复合物,不产生沉淀或沉淀很少。

抗原-抗体反应可分为两个阶段。

第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段。这一阶段使亲水系统变为憎水系统,反应很快,几秒钟至几分钟即可完成,但无可见反应。

第二阶段为抗原与抗体反应的可见阶段,出现凝集、沉淀、补体结合等反应。这一阶段的反应比较慢,需要几分钟至几十分钟,并受电解质、温度、酸碱度等因素的影响。

知识加深

1.抗原是指一种能刺激人或动物体产生抗体或效应细胞,并能与抗体或效应细胞发生特异性反应的物质。具有异物性、大分子性、特异性。

2.抗体是机体在抗原物质刺激下,由B细胞分化成的浆细胞(效应B细胞)所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。

抗原一般是侵入机体的病原微生物或者机体病变的、非正常的成分,是入侵者;抗体是对付抗原的防御力量

不论天然的还是人工合成的分子,只要能被机体的免疫系统识别的都可以诱导机体的免疫应答,产生相应的抗体。大多数抗体和抗原本身是既有免疫原性(诱发产生特异抗体),又有反应原性(与特异的抗体相结合)。抗原与抗体的特异性反应不仅可以在体内进行,而且可以在体外进行。一切利用血清学技术方法所进行的各种测试都是基于这一根本的特性。抗体反应技术的应用之广泛已经远远超出了免疫学、医学、甚至生命科学的范围,成为—类微量,灵敏,快速的检测分析方法。

血清

血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。

胎牛血清 、透析型胎牛血清 、天然低IGG胎牛血清 、干细胞培养胎牛血清 、特殊用途胎牛血清 、活性炭/葡萄糖处理胎牛血清 、胎牛血清替代物 、小牛血清 、新生牛血清 、加强型小牛血清 、补铁小牛血清 、成牛血清 、供体马血清 、兔血清 、鸡血清 、猪血清 、马血清 、其他动物血清 、合成血清替代品。

主要成分/血清

血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。主要是:

第一:血清的成份可能有几百种之多,对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;

第二:血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制;

第三:不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。

主要作用/血清

●提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。

●提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(氢化可的松、地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。

●提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。

●提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。

●对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,硒等

鉴别方法/血清

血清

血液成分

血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出,放入试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻。凝血块收缩,其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清,也可于凝

血后经离心取得。在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,所以血清中无纤维蛋白原,这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中,血小板释放出许多物质,各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化,如凝血酶原变成凝血酶,并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰,血液中许多化学成分的分析,都以血清为样品。

血浆

血浆是血液的液体成分,血细胞悬浊于其中。人体含有2750-3300毫升血浆,约占血液总体积的55%。血浆的绝大部分是水(体积的90%),其中溶解的物质主要是血浆蛋白,还包括葡萄糖、无机盐离子、激素以及二氧化碳。血浆的主要功能是运载血细胞,同时也是运输分泌产物的主要媒介。

将新鲜血液离心,使血细胞沉降,上层淡黄色清液即是血浆。血浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。

常见问题/血清

保存方法

血清应保存在-5℃至-2℃。然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

如何解冻血清才不会使产品质量受损?

将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8C冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

避免产生沉淀物

1、解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃,实验显示非常容易产生沉淀物。

2、解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生

3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。

4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

5、若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理? 欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。

何谓热灭活

一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

有必要做热灭活吗?

实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显着的增多,这些沉淀物在倒立显微镜下观察,像是 "小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37C环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

购买的时候注意询问厂家是否是已灭活血清。

血清兽药/血清

根据注入细菌或病毒的不同,以及注射到不同种类的动物体内,得到不同免疫性能的抗毒血清。根据河南顺鑫动物血液制品有限公司的市场调研,当前市场上动物抗毒血清大致分为以下几类抗毒血清:

1、猪抗毒血清:猪瘟抗毒血清,猪蓝耳抗毒血清,猪圆环病毒抗毒血清,猪伪狂犬抗毒血清,猪细小病毒抗毒血清,猪口蹄疫抗毒血清,猪流感抗毒血清等。

2、禽抗毒血清:小鹅瘟抗毒血清,鸭肝抗体抗毒血清,鸭浆膜炎抗毒血清,禽流感抗毒血清,新城疫血抗毒清等

3、牛抗毒血清:牛口蹄疫抗毒血清,奶牛乳房炎抗毒血清,牛流行热抗毒血清,牛病毒性腹泻抗毒血清,牛出血性败血症抗毒血清等

4、羊抗毒血清:羊痘抗毒血清,羊口蹄疫抗毒血清,羊小反刍兽疫抗毒血清,羊快疫抗毒血清,羊肠毒血症抗毒血清,羊猝疽抗毒血清,羊黑疫抗毒血清等

5、犬抗毒血清:犬狂犬病抗毒血清、犬瘟热抗毒血清、犬副流感抗毒血清、犬腺病毒抗毒血清与犬细小病毒病抗毒高免血清,狐貉水貂的伪狂犬抗毒血清、细小病毒抗毒血清、乙脑抗毒血清等

血清

主要成份:蒙古黄芪提取液、抗病毒药、ALR、混感血清。

性状:本品为黄棕色澄明液体。

功能:本品能诱导机体产生干扰素,调节机体免疫功能,促进抗体形成,刺激巨噬细胞吞噬作用,增强机体对病原微生物的吞噬作用,具有抗炎、抗病毒、抗毒素和提高机体免疫功能等作用。

主治:

1、由猪瘟、伪狂犬病引起的体温升高,精神沉郁,磨牙,流涎,呕吐,肌肉痉挛,食欲减退;便秘、腹泻,拉恶臭粪便或便秘腹泻交替;体表局部出现紫红色出血点,指压不退色;呼吸困难,胸式呼吸等。

2、由传染性胃肠炎、流行性腹泻引起的呕吐、腹泻或水样腹泻、下痢、脱水;母猪母乳停止剧烈腹泻等症。

3、由猪细小病毒病、蓝耳病引起的母猪多次发情而不受孕,早产、后期流产、产死胎、木乃伊胎、产弱仔猪或产少数仔猪;新生仔猪呼吸困难,运动失调;有时表现耳部发绀等。

4、对以上疾病混合感染或与细菌病混合感染都有很好的治疗效果;对鸡传染性法氏囊等病毒性疾病疗效确切。

(资料来源:中国兽用生物制品)返回搜狐,查看更多



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