最常见的酶动力学实验是改变底物浓度和测量酶的速度。目标是确定酶的Km（产生一半最大速度的底物浓度）和Vmax（最大速度）。如果您的目标是确定转换率kcat，而非Vmax，请使用方程的替代版本。

创建一张XY数据表。将底物浓度输入X，将酶速度输入Y。如果您有若干个实验条件，则将第一个输入A列，第二个放入B列，依此类推。

此外，您也可以选择Prism的样本数据：酶动力学-Michaelis-Menten

输入数据后，单击“分析”，选择“非线性回归”，选择“酶动力学方程”面板，然后选择“Michaelis-Menten酶动力学”。

Y=Vmax*X/（Km+X）

Vmax是单位与Y相同的最大酶速度。这是外推至极高底物浓度的酶速度，因此期值几乎始终高于实验中测定的任何速度。

Km是Michaelis-Menten常数，单位与X相同。其是达到最大酶速度一半所需的底物浓度。

在非线性回归可用之前，研究者必须将曲线数据变换成直线，进而可以使用线性回归进行分析。一种方法是使用Linewaver-Burk图，该作图法绘制了底物浓度的倒数与酶速度的倒数。

如果您创建Linewaver-Burk图，请仅使用其来显示您的数据。不要使用线性回归线的斜率和截距来确定Vmax和Km的值。如果您这样做，您将不会得到最准确的Vmax和Km值。问题是变换（倒数）扭曲了实验误差，因此双倒数作图法不符合线性回归的假设。使用非线性回归获得最精确的Km和Vmax值。

如需创建Lineweaver-Burk图（有相应线），首先需要记录非线性回归为Vmax和Km报告的值（我们稍后需要这些值）。首先，在包含数据的数据表中，单击工具栏中的“分析”按钮，从分析的“变换、归一化...”部分中选择“变换”，然后单击“确定”。在“函数列表”下拉菜单中，选择“药理学和生物化学变换”。选择“Lineweaver-Burk”选项，然后单击“确定”（确保选中“创建结果的新图表”复选框）。

现在，我们想在Lineweaver-Burk图中添加适当线。请勿简单地执行线性回归，因为这不会生成上述正确线。而是按以下步骤进行操作：

1.在变换数据的图表中，单击工具栏“分析”部分中的“分析”按钮

2.从分析的“生成曲线”部分中选择“绘制函数”，然后单击“确定”

3.在出现的对话框中，从“函数”选项卡上的函数列表中选择“直线”

4.使用“函数”选项卡底部的“X值范围”选项指定线的起点和终点

5.切换至“参数值和列标题”选项卡

6.计算1/Vmax，并输入该值作为Y截距（其中Vmax是先前通过非线性回归报告的值）

7.输入Km/Vmax作为斜率（其中Km和Vmax是先前通过非线性回归报告的值）

8.单击“确定”

9.Prism将生成标题为“绘制函数”的新数据表。单击并将此表拖到Lineweaver-Burk图表上，然后单击“添加”

•查看所有酶动力学分析的假设列表。

•该方程精准拟合的曲线与拟合转换数Kcat（而非Vmax）的方程的曲线相同。  kcat乘以Et（酶位点的浓度）的乘积等于Vmax，因此如果您知道Et，则Prism可拟合Kcat。

•该方程是变构酶方程的特例。变构模型增加了一项额外参数：Hill斜率h。当h等于1.0时，两个模型相同。

•请注意，Km并非衡量酶和底物之间结合强度的结合常数。其值考虑了底物对酶的亲和力，以及将与酶结合的底物转化为产物的速率。

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