抗生素分析信息

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2024-04-21 22:13| 来源: 网络整理| 查看: 265

确保抗生素的安全性

抗生素或抗菌剂是用于治疗或预防细菌感染的抗微生物药。 抗生素被称为二十世纪的医学英雄。 但是,正因为其良好的疗效且易于获取,导致这类药物过度使用,并在近年来引发抗生素耐药性。

抗生素根据其生产方式或杀菌作用方式分为 类。 它们可以通过生物方式(发酵)、生物和化学方式(半合成)或完全化学合成来生产。

生物/天然产物抗生素的分析 例如氨基糖苷类、大环内酯类、某些四环素类、脂肽类和糖肽类

通过发酵工艺生产的抗生素在可预测性和可控制性上弱于合成抗生素,而且比后者更复杂。 因此,发酵产品的可变性通常大于化学合成产品。 与合成产品相比,发酵产品的杂质谱还可能更复杂且更难以预测。

最常见的一组生物合成抗生素就是氨基糖苷类抗生素。 氨基糖苷是由糖基和氨基组成的一种分子。

Gentamicin C congener structures庆大霉素R1R2R3C1aHHHC2HCH3HC2bCH3HHC2aHHCH3C1CH3HH

链霉素是首个被发现且用于临床治疗的氨基糖苷类抗生素。 这些抗生素具有蛋白合成抑制能力,可导致细胞死亡,因此现今作为临床和兽医药品被广泛用于治疗细菌感染。 但是,这些抗生素也可能具有严重的副作用,并引起不同程度的毒性效应。 必须开发出灵敏可靠的分析方法来表征和定量分析药物纯度,并检测微量降解产物或杂质。 根据其生产性质(发酵),往往有多种含相关成分(同系物、异构体)和组分的混合物必须加以监测和控制。

Reversed-phase HPLC separation of gentamicin on the Acclaim AmG C18 LC column with Dionex Corona Veo RS (rapid separation) charged aerosol detection (CAD) demonstrates speed and resolution advantages with optimized solvent composition.色谱柱Acclaim AmG C18, 3 µm尺寸4.6 x 150 mm流动相 A100 mM TFA流动相 B乙腈流速1 mL/min进样 体积5 µL温度30 °C检测Corona Veo RS(过滤器 = 5.0s;蒸发温度 = 35 °C;数据采集速率 = 5 Hz;幂函数 = 1.00)样品庆大霉素 (1 mg/mL)峰C1aC2C2bC2aC1

许多氨基糖苷类抗生素具有结构相关性,实际上是从另一种抗生素合成而来。 例如,西索米星是从小单孢菌发酵液中分离得到的一种广谱氨基糖苷类抗生素。 奈替米星是由西索米星制备出的一种半合成氨基糖苷类抗生素。 西索米星和奈替米星均主要用于治疗严重感染,尤其是那些对庆大霉素耐药的感染。 依替米星是由庆大霉素 C1a半合成制备而来,以此类推。

氨基糖苷类抗生素及其相关杂质的分析往往是根据其亲水性和正电荷性,通过离子对反相(RP)高效液相色谱(HPLC)来实现。 但是,由于缺少合适的发色团,无法通过紫外线(UV)来检测氨基糖苷类抗生素。 通常使用 Corona 荷电气溶胶检测器(CAD)、蒸发光散射检测器(ELSD)、质谱仪(MS)和电化学检测器来检测这些化合物,而无需进行柱前衍生化。

Separation of gentamicin in A) topical cream extract, B) ophthalmic ointment extract, C) topical ointment extract, and D) diluted ophthalmic solution (25% signal offset) on the Acclaim RSLC PA2 LC column with a HFBA/TFA gradient. The column temperature was maintained at 15 °C, which allowed greater separation between gentamicin C2b and gentamicin C2.色谱柱Acclaim RSLC PA2, 2.2 µm Analytical (2.1 x 100 mm)流动相 A0.025:95:5 HFBA:DI 水:乙腈流动相 B0.3:95:5 TFA:DI 水:乙腈梯度0 至 3 min: 1-10% 流动相 B (99-90% 流动相 A)3 至 8 min: 10-100% 流动相 B (90-0% 流动相 A)8 至 11 min: 100% 流动相 B进样前以 99% 流动相 A 进行 4 min 的平衡流速0.45 mL/min进样 容积1.0 µL温度15 °C检测CAD(Corona ultra RS,雾化器温度 15 °C,低过滤器,60 Hz 数据采集速率)样品A) 硫酸庆大霉素乳膏B) 硫酸庆大霉素眼膏C) 硫酸庆大霉素软膏D) 硫酸庆大霉素眼用溶液峰基质中无法保留的离子加纳糖胺样化合物西索米星庆大霉素 C1a庆大霉素 C2庆大霉素 C2b庆大霉素 C2a庆大霉素 C1

有关某些氨基糖苷类药物(以及由这些药物制成的药物产品)的 USP 专题论文往往涉及高压阴离子交换(HPAE)离子色谱(IC)检测结合集成式脉冲安培检测(IPAD)。

Determination of kanamycin A, kanamycin B and tobramycin on a Dionex CarboPac PA1 anion exchange column by HPAE-IPAD.色谱柱Dionex CarboPac PA1 guard, 4 x 50 mm Dionex CarboPac PA1 guard, 4 x 250 mm洗脱液2 mM KDH洗脱源Dionex EGC-500 KOH 纯化柱,配有 CR-ATC 600 捕获柱,Dionex 高压脱气机流速0.5 mL/min柱温30 °C检测器室30 °C进样 容积20 µl检测iPAD, AAA-Direct Au 一次性电极,0.002” 厚垫片参比电极pH/Ag/AgC1,pH 模式波形AAA-Direct,对比 pH,1.67 Hz峰空隙体积系统峰卡那霉素A卡那霉素B妥布霉素氧降 合成抗生素的分析 例如磺胺类药物、喹诺酮类药物、恶唑烷酮类药物

化学合成抗生素在其制备过程中往往涉及大量中间化合物,这些化合物在最终产品中作为杂质留存。 化学抗生素通常由 HPLC 结合 UV 检测来测定,但如果活性药物成分 (API) 或杂质中缺少发色团,则 IC 结合抑制型电导检测被认为是进行选择性测定的最佳替代方法。

Overlay of seven chromatograms of 0.1 mg/mL linezolid spiked with 10 µg/L morpholine, separated on a Dionex IonPac CS19 column set.色谱柱IonPac CG19 Guard, 2 x 50 mm IonPac CS19 Analytical, 2 x 250 mm洗脱液7.5mM MSA洗脱源EGC-500 MSA 结合 Dionex CR-CTC 500流速0.25 mL/min进样 容积100 µLConc 色谱柱Dionex IonPac TCC-ULP1检测抑制型电导,Dionex CSRS 300, 2 mm, 7 mA, 再生模式峰钠离子铵离子钾离子吗啉 10镁离子钙离子 半合成抗生素的分析 例如 β-内酰胺类(青霉素类、头孢菌素类、青霉烯类、碳青霉烯类和单环 β-内酰胺类)、部分四环素类和糖肽类

半合成抗生素的杂质通常少于其生物对应物。 杂质可能包括含有相关杂质的发酵起始原料、合成副产物、合成中间体和降解产物。

β-内酰胺类抗生素是一类广谱抗生素,包括分子结构中含有 β-内酰胺环的所有抗菌药物。 这些抗生素通过抑制细菌细胞壁合成发挥抗菌作用。 随着这类抗生素的广泛应用,一些细菌种群已显示出对 β-内酰胺类药物产生耐药性的能力,并且变得更具毒性。

Cephalosporins are a members of the β-Lactam antibiotics class, first discovered and isolated from the fungus Cephalosporum acremonium. The core structure of these antiobitics features a number of hydrogen bond donors and acceptor groups, as well as an acid function. Together these groups contribute towards the polarity of this class of compounds.

虽然 β-内酰胺类抗生素在许多方面与其他抗生素相似,但它们在药代动力学、抗菌活性以及引发严重过敏反应的潜力等方面有所不同。 部分 β-内酰胺中间化合物和衍生物(来自发酵和/或合成)也具有相似的致敏作用和交叉反应属性。 β-内酰胺中间化合物(如 β-内酰胺类抗生素 API 前体)在用于生产之前可能会经历分子变化或纯化。 这些变化可能导致中间化合物产生抗原特性,从而引发过敏反应。 药品制造商必须采取措施控制所有 β-内酰胺产品的交叉污染和杂质风险。

Separation of a mixture of cephalosporins on a Syncronis aQ LC column with 3 µm particle size. Good separation was achieved in a total run time of six minutes, with an elution window of 1.8 minutes for all four analytes. A controlled interaction mechanism and selectivity of the Syncronis aQ polar endcapping group is demonstrated.Using the Chromeleon Chromatography Data System and simultaneous detection with UV and MS detectors provides complementary information for impurity profiling. The MS component channel with the extracted ion chromatograms of seven antibiotic standards was overlaid to the UV trace. The two traces could be perfectly aligned by taking into account the delay time between the two detectors. This simple comparison reveals the presence of an UV active impurity.

β-内酰胺酶抑制剂(如克拉维酸(克拉维酸)和舒巴坦)通常与 β-内酰胺类抗生素组成复合制剂,通过拮抗细菌耐药性来提高其疗效。 因此,与抑制剂以及抗生素相关的杂质需要加以控制和监测。

Chromatographic comparison of clavulanate on the Dionex IonPac AS11 column A) without and B) with 4 µg/mL (0.8 %) 2-ethylhexanoic acid. This column has high capacity, low surface hydrophobicity and is able to separate a wide range of inorganic and organic anions in complex matrices. 色谱柱IonPac AG11, AS11, 2 mm洗脱液3 mM KOH(0 至 10 min), 3 至 60 mM KOH(10 至 10.1 min), 60 mM KOH(10.1 至 20.1 min)洗脱源EGC II KOH 结合 CR-ATC流速0.25 mL/min进样 体积5 µL温度30 °C检测抑制型电导,ASRS 300 2 mm,再生模式,2 mA 抑制器电流(在 3 mM KOH 期间),在 10.1 min 时切换至 38 mA 样品克拉维酸(含或不含 4 µg/mL (0.8 %) 2-乙基己酸)峰2-乙基己酸 (4 µg/mL – 0.8 %) 抗生素在生物制药生物工艺中的应用

抗生素在生物制药的生产过程中得到大量应用。 表达生物治疗性蛋白(如抗体)的哺乳动物细胞系必须维持数周。 它们在添加了各种维生素、生长因子和抗生素的培养基中进行培养,以避免发生污染和生长障碍。 需要对产物中的残留抗生素进行检测,以确保患者的安全。

Analysis of a sample of cell lysate after tigecycline treatment (A) and the same sample spiked with 0.05 μg/mL tigecycline (B) using an on-line SPE-HPLC-UV method. This is a convenient method to determine trace amounts of tigecycline in tigecycline-treated cells which cannot be determined using a routine HPLC-UV detection method.条件在线 SPE色谱柱Acclaim PolarAdvantage II (PA2) Guard Cartridge, 5 µm, 4.6 x 10 mm (P/N 069699)流动相DI 水流速1.0 mL/min进样 体积1500 µL(在在线 SPE 纯化柱上)分离色谱柱Acclaim 120, C18, 3 µm Analytical, 3.0 x 150 mm (P/N 063691)流动相磷酸盐缓冲液/CH3CN (85:15. v/v)流速0.6 mL/min自动进样器温度4 °C柱温30 °C检测UV 吸光度(247 nm) 专题学习内容 手册 离子色谱在制药和生物制药领域的应用

了解现代离子色谱系统用于制药和生物制药分析的独特益处

应用手册 制药应用手册—抗生素

进一步了解该应用手册,其编制目的是通过提供与抗生素分析相关的各种应用示例来帮助制药科学家。

应用 在紧凑型离子色谱系统中使用 HPAE-PAD 测定托普霉素

了解 HPAE-IPAD 方法如何使用高压 Dionex Integrion HPIC 系统来测定卡那霉素 A、卡那霉素 B 和托普霉素。

应用 使用适用于氨基糖苷类抗生素分离的 pH 值稳定的专用色谱柱分析庆大霉素

本研究描述了使用离子对反相液相色谱(IP-RPLC)对庆大霉素同系物及其相关化合物进行高效分离。

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了解现代离子色谱解决方案如何与制药实验室完美配合并与药典专著现代化保持一致。

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