结果显示:按标准进行的含量测定结果批间差异比较大，但基本上都低于溶出度；而直接稀释法测定的含量结果与溶出度测定结果出奇的一致，且波动性较小。这就说明了一个道理，制剂在含量测定样品贮备溶液制备中浓度相对较高（其实绝对并不高，80μg/ml，且溶剂中易溶），其中的主成分不能被全部溶解释放出来；而此时如果是API加辅料的话则可能很容易溶解释放出来，这一点对于含有大量黏合剂的缓释制剂中尤其可能，而对于一些特殊剂型例如包埋类的产品，则可能性更是存在。这样如果你采用直接加入法测定的回收率看起来可能非常不错，但是它是在骗你的。

所以此时就显示出的结果可能就是回收率很好，但产品的质量比预期要低，而且波动性可能还很大。

这时就显示出加样回收率的优势了：例如一个产品理论含量为100%，测得的含量为90%，那么意味着回收率为90%，而你采用API加辅料测定回收率时回收率为100%，而如果你采用的是一半制剂一半API加辅料的加样回收的方法的理论回收率为（90%+100%）/2＝95%，如果上下各有1%的误差的话，前者回收率的范围是99%～101%，后者的范围是94%～96%，那么即使你回收率的可接受标准是每个样品均在97.0%～103.0%，你也会发现其不符合要求，检验方法有问题。

1.2研磨吸附的影响

其实我遇到过更多的情况是这样的，很多品种的含量均匀度平均值与溶出度的结果是一致的，波动性也很小；而含量测定的结果却明显低于上述两项，而且往往色谱条件也是一致的。与上面的结论是一样的，最终的调查结果是含量测定的结果有问题，含量均匀度与溶出度的检验结果更可信。这在小规格制剂品种是非常常见的。

有一次我在给一家企业的研发部门讲检验技术方面的课时，甚至遇到了中间体含量千奇百怪的数据，从80%多到100%，什么样的数都有，制剂人员根本就不敢压片，我就告诉他们，你们直接按照理论片重压就好了（直接压片工艺），不用管检验数据，结果无论是含量还是含量均匀度都与预期是一致的。

QC相对于制剂中间产品的检验来说，更重要的是一种确认；如果你用QC的检验结果作为指导制剂生产（例如折算片重），往往可能会造成灾难性的后果。不管QC人爱不爱听，之前我也不爱听过，但这也是我血的教训得出的结论。事实上也是，发现OOS后调查的结果，原因是由于检验造成的可能不低于80%，剩下可能在10%是取样的问题，不到10%才是生产的问题。当然我会推文中去解释这是为什么、以及怎么去解决。

看到本节的小标题，大家可能也猜到了原因，就是吸附！

我们国内受药典影响，很多研发人员在检验方法开发时都习惯于采用研磨的方法，而有很多产品，尤其是小规格产品，在研磨的过程中主成分易被研磨工具所吸附，进而造成你称取那部分的样品主成分的含量相对较低，致使最终产品的检测结果偏低，而一旦这样的结果用于指导压片/填充，可能你的含量均匀度或溶出度的结果就不一定高成什么样子了。

当然由于吸附的不可控性，你的含量结果也有可能有很大波动，或者接近于预期值或者远离预期值。

在这种情况下，为什么回收率是怎么“骗”我们的呢？道理很简单，你的API是直接加入到容量瓶里去的，这个过程是没有研磨工具去吸附你的API的，所以你可能得到很好的数据！换句话说，你的检测是有研磨过程，而你的回收率验证是没有这个过程的，也就是说，你的验证与你的方法是不一致的！你回收率验证的操作应该是，分别取相当于20片量的API和辅料，置研钵中，研细（时间、力度应与检验一致），再称取规定重量的样品，去配制溶液，再去检测回收率。

还有一点需要说明的是，做回收率不同样品应分别研制，而不要从一个研磨中称取，以避免恰好该研磨过程吸附极少而带来的“假阳性”数据。必要时应考虑不同人员之间的差异。

2、有关物质检验

其实本部分内容在本论坛中已经有过阐述，还是那个要求，你的验证应与你检验方法一致。例如对于特定杂质，你的检验方法是校正因子的方法，而你在回收率验证时采用的是外标法计算回收率，此时的数据就是一个伪数据，因为你杂质的计算方法是不同的，在回收率计算时没有采用校正因子。这也是我当时发现ANDA方法验证中存在的缺陷，但“所幸”的是CDER没有发现。

3、微生物限度检验

3.1纯化水中的微生物

很多人在论坛中问，纯化水微生物限度检验要进行方法学验证吗。

其实道理很简单:

首先要清楚微生物检验方法验证验证的是什么，不外就是通过回收率来确认你的样品本身对菌是否有抑制作用，如果有的话方法就不适用，如果没有的话方法就适用。那么水本身没有抑菌性是公认的，你还需要验证吗？

其次，如果水本身有抑菌性的话，那你的培养基中含有95%以上的水，也就是说你一个培养皿里15ml培养基其中有约13ml的水，而你纯化水检验时采用的薄膜过滤法所残留的水也就0.1ml，你13ml的水都不去关心，你却去关心那0.1ml的水？两个皿之间培养基水的量之间差得也不止0.1ml吧！

第三，也就是最关键的一个。你如果要做回收率验证，那么你采用什么菌种，还是药典中那五种吗？例如中国药典现行版检测的培养基是富营养的营养琼脂培养基，这五种菌在该培养基中均适于生长，你用这五种菌测得的回收率数据当然会非常漂亮，除非你的DOE有问题，但它能代表实际吗？简单的一个实验就会得出结论，用一组纯化水，分别采用营养琼脂和R2A培养基进行检测，可能最终的结果是，用营养琼脂培养基检测的结果几乎都是