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琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程

凝胶电泳操作注意事项：

1. 

缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，

DNA

不迁移，或迁移极慢，在高离子强度

的缓冲液中，电导很高并产热，

可能导致

DNA

变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长

时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。

2. 

琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响

DNA

的迁移及荧光背景

的强度，应有选择地使用。

3. 

凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，

避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。

4. 

样品加入量：一般情况下，

0.5cm

宽的梳子可加

0.5ug

的

DNA

量，加样量的多少依据加

样孔的大小及

DNA

中片段的数量和大小而定，

过多的量会造成加样孔超载，

从而导致拖尾和

弥散，对于较大的

DNA

此现象更明显。

5. 

电泳系统的变化会影响

DNA

的迁移，加入

DNA

标准参照物进行判定是必要的。

6. DNA

样品中盐浓度会影响

DNA

的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这

种影响。

7. DNA

迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有

可能分辨范围广泛的

DNA

分子，制备琼脂糖凝胶可根据

DNA

分子的范围来决定凝胶的浓度。

小片段的

DNA

电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。

琼脂糖加样时候注意事项：