什么是 PCR(聚合酶链式反应)?

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什么是 PCR(聚合酶链式反应)?

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聚合酶链式反应 (PCR) 最初由美国生物化学家 Kary Mullis 于 1983 年开发。 1993年,他因其开创性工作而获得诺贝尔化学奖。

PCR 在分子生物学中用于制作(扩增)一特定DNA序列 的或基因片段?

使用 PCR 可以从非常少量的 DNA 中生成数千到数百万个特定 DNA 片段的复制。

PCR 是医学和生物学研究实验室中常用的工具。 它用于处理 DNA 的早期阶段以进行测序,检测基因是否存在以帮助识别病原体, 在感染期间,以及从微小的 DNA 样本生成法医 DNA 图谱。

PCR如何运作?

无论 DNA 样本是什么,每个 PCR 背后的原理都是相同的。

建立 PCR 需要五个核心“成分”。分别是:

要复制的 DNA 模板

引物:启动 PCR 反应的短DNA片段,旨在与您要复制的DNA片段的任一侧结合

DNA核苷酸碱基:(也称为 dNTP); DNA 碱基(A、C、G 和 T)是 DNA 的组成部分,需要构建新的 DNA 链

Taq聚合酶: 添加新的DNA碱基

缓冲液:以确保正确的反应条件

PCR 涉及称为热循环的加热和冷却过程,该过程由机器执行。

主要分为三个阶段:

变性——双链模板 DNA 被加热以将其分离成两条单链

退火——温度降低以使 DNA 引物附着到模板 DNA 上

延伸——温度升高,新的 DNA 链由 Taq 聚合酶生成

这三个阶段重复 20-40 次,每次都将 DNA 复制数加倍。

一个完整的 PCR 反应可以在几个小时内完成,使用某些高速机器甚至不到一个小时。

PCR 完成后,可以使用一种称为电泳的方法来检查所产生的 DNA 片段的数量和大小。

图1:显示了聚合酶链式反应 (PCR) 的主要步骤。



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