2005年12月我国第一部《慢性乙型肝炎防治指南》颁布 ,2006年1月卫生部颁布了《2006-2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划》。其目的在于科学、规范和有效开展我国乙型肝炎防治工作。卫生部计划在未来3～4年内逐步建立全国乙型肝炎实验室检测网络,制定《全国乙型肝炎实验室检测工作技术规范》,加强实验室网络人员培训,提高乙型肝炎的实验室诊断水平。以下就目前我国开展的乙型肝炎实验室诊断技术及其质量控制进行简要概述。

乙型肝炎标志物检测

1.方法与原理 　乙型肝炎标志物检测目的在于确认患者是否感染乙型肝炎病毒(HBV),是乙肝实验室诊断中最常用的检测方法。目前临床应用的主要方法有:①免疫荧光技术:由于荧光标记的抗原 (或抗体) 受血清成分等本底因素影响过大而应用较少。在此技术上改进的时间分辨免疫荧光法(TRFIA),延长了荧光寿命,降低了本底因素影响,特异性和稳定性都有显著提高,对HBsAg检测下限为0.35～0.5ng/ml。②固相放射免疫法:灵敏度较免疫荧光提高100～1000倍,检测低限达pg水平,但因同位素稳定性差、对环境造成污染等原因也很少用于临床乙型肝炎标志物检测。③酶联免疫吸附试验(ELISA)技术:是目前国内最为常用的乙型肝炎五项检测方法。该方法检测HBsAg灵敏度下限为0.5ng/ml。④微粒子酶免法(MEIA):是近年来新发展起来的一种新的抗原抗体检测技术,该方法对HBsAg检测灵敏度为0.17～0.2ng/ml 。

2.质量控制 　卫生部临床检验中心从1988年开始在全国范围内开展乙型肝炎标志物检验的质量评价活动,并制定了临床检验中心室间质量评价方案(EQA)。但实验操作人员的主观性使EQA成绩难以真实反应一个实验室的检测水平。因此有效的室内质控对保证日常检验结果的准确性更有意义。

ELISA试验中,2倍标准差(2SD)是一般公认的允许误差限度。每批测定放一份质控血清时,一次超过2SD应作为“告警”,二次超出2SD为“失控”。当质控过程中出现失控时应查找原因,通常是试剂盒或质控血清失效造成。对更换试剂盒或更换质控血清仍然难以明确原因的应该进行最佳条件下已知值质控血清变异(OCV)检验。如果OCV检验的结果仍在正常范围,提示实验操作存在问题。双抗体夹心法测定抗原是基于待检抗原在固相抗体和酶标抗体间的桥接作用,一步法测定HBsAg时,如标本中HBsAg浓度过高,则因竞争抑制作用,难以形成“夹心复合物”,出现显色变浅甚至不显色的现象,称为HOOK现象,导致HBsAg的漏检。国内资料显示,一步法检测HBsAg的漏检率为0.47%。两步法,尤其是TRFIA检测法可最大限度地避免HBsAg的漏检。

HBV DNA定量检测

1.方法与原理HBV 　定量检测目的在于明确乙型肝炎患者的病毒复制水平、判断患者病情、抗病毒疗效,对预后判定有一定的价值。目前用于HBV DNA的检测方法主要有两类:一类是以PCR为基础,如实时荧光定量PCR。另一类是以核酸杂交为基础,如斑点杂交和分枝DNA(bDNA)技术等。斑点杂交以定性检测为主,敏感性较差。实时荧光定量PCR技术是目前国内医疗机构应用最为广泛的检测方法。该反应体系内使用的标准品和内标为体外制备的质粒,酶切、纯化后-70℃保存效期为6年。国产试剂在检测灵敏度(104拷贝/ml)、测定范围(104～108拷贝/ml)等方面已基本达到国外同类产品水平。

2.检测低水平复制HBV HBV感染时间超过30年的患者,随着感染时间的延长,HBV血清标志物浓度也逐渐降低(HBsAg