在既往的推文中，我说过几次关于Image Pro Plus测量面积或者面积比的方法。

很多小伙伴还是会在后台咨询如何测量之类的问题？我仔细想了想，很可能是大家还未充分理解什么是目标区域？什么是总面积？所以在遇到实际分析案例时，无法把握测量过程。

实际上，Image Pro Plus测量面积或面积比的核心思想一直都没变。我们要做的仅仅是将目标区域圈选出来，计算面积，然后除以总面积就可以得到面积比。

今天，把这些概念再以例子的形式解释一遍。

1、什么是目标区域？

目标区域即你感兴趣的区域。有人说这不挺简单的的嘛？还用你说。

这一概念初看很简单，事实上隐藏的另一层含义，即你必须将感兴趣的区域选择出来，而无关区域绝对不选。

例1：肝脏纤维化Masson染色图片，需测量胶原面积。↓

有经验的一看就知道，如果我们想要测量图中胶原的总面积，只需要使用Image Pro Plus的Color颜色模式就可以很快的选择蓝色部分，并计算其面积。

例2：胰岛免疫组化染色，需测量标记阳性标记的面积大小。↓

可以看出图中，一共3块区域被呈现棕黄色。标记1所示为测量目标。标记2为假阳性区域。标记3虽是正确标记，但胰岛未拍摄完整。

当我们使用Image Pro Plus测量时，首先需要设定将标记2所示的胰岛用不规则工具圈选为AOI，这样可以将标记1和标记3排除在外，然后才能进行下一步测量。同时，放大后可见胰岛中存在较多的蓝色细胞核，以及其它的未被染上棕色的细胞。所以我们必须通过Image Pro Plus中的HSI颜色模式将这些颜色区分开来，仅计算被该胰岛中被染上颜色的区域。如下↓

小结1：

由上面的例子可以看出，目标区域的选择非常依赖我们对目标区域的解读，明确其医学含义比单纯的测量要重要。记住一个原则：应选尽选，不应选择的绝对不选。

2、什么是总面积？

理解了小结1，对于理解总面积的含义很重要。总面积的正确测量直接关系到“面积比”这个指标的准确性。

很多时候，总面积的含义显得更为复杂。因为它受到了图片特征或组织特征的影响，我们必须要加以甄别。

例3：肝脏HE染色图片

可以看出，同样是肝脏组织的HE染色切片，拍摄倍数也相同。上面一张图片中肝脏组织充满了整张图片，并没有看到明显的空隙或空白，此时肝脏组织总面积就是图片的面积。

但是下面这张图片就存在非常明显的中央静脉，此时肝脏组织的总面积必须要扣除中央静脉处的空白。否则肝脏组织的总面积就会因该误差而变大。

正确做法：采用Image Pro Plus选定图中空白区域作为AOI，测量其面积，然后用图片总面积减去空白区总面积，即可得到准确的组织总面积。

有人可能会说，无所谓啦，就一个孔而已。那么请看下面这张图。↓

还有这张 ↓

由这些例子可以看出，在使用Image Pro Plus时，我们必须要重视图片空白区域的影响，准确测量总面积，否则很可能会影响测量指标的正确性。

举一个很生动的例子：主动脉弓缩窄导致的压力负荷心脏疾病模型中，心肌纤维在早期代偿性肥大，但这种肥大可能并不太明显。若用数据来证明心肌细胞确实肥大了，可以采用Image Pro Plus对相同倍数下的心肌纤维横截面积进行测量，面积越大代表心肌纤维越粗。此时，准确扣除空白区域就显得非常重要了。↓

例4：胰岛某细胞免疫组化染色 ↓

为了证明胰岛中某细胞增生，导致细胞数量增多。从Image Pro Plus测量的角度来看，就是要证明“胰岛中目标细胞的面积/胰岛总面积”这一指标增大，引申一下就是要证明“胰岛中的“阳性标记区域面积/胰岛总面积”增大。

为了达到这个测量目的，我们需要作出如下分析：

（1）正确的选取完整的单个胰岛，勾勒出胰岛轮廓并扣除空白区域，以AOI作为单个胰岛的总面积；

（2）正确圈选并计算该单个胰岛中阳性标记物，排除周围的其它胰岛或假阳性影响；

（3）计算阳性物面积/单个胰岛总面积的比值；

（4）对每个完整的胰岛进行上述测量，计算上述比值，最后求平均值作为该动物胰岛中的阳性物面积/单个胰岛总面积，也就等同于“胰岛中目标细胞的面积/胰岛总面积”这一指标。

小结2：

可以看出，总面积的概念一直在变化，相同样本时，总面积概念受到空白区的影响；不同样本，总面积受到组织特征和医学含义的影响。因此，再次强调正确理解所总面积，对于“面积或面积比”这类的数据有着非常重要的意义。