NGS 技术的发展和临床应用推动了肿瘤的精准治疗。靶向基因、肿瘤突变负荷、微卫星状态等对肿瘤治疗预测和预后都发挥着重要作用。

2019 年 CSCO 肿瘤生物标志物委员会发布的首个《中国 NGS 在临床肿瘤学实践中的调研报告》指出，目前NGS已成为中国临床肿瘤医生常用检测工具。

相较传统检测技术，NGS 技术复杂性较高，NGS 报告信息庞杂，临床工作中，我们关于 NGS 常常有诸多疑问，本文结合相关文献及指南分点阐述。

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NGS 技术如何实施（具体流程）？

A:NGS 技术一般包括收样质控、病理质控、溶血质控、抽提质控、建库质控、上机质控、数据分析质控，这 7 个质控步骤都很重要，也是准确结果的前提和保证。

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NGS 对肿瘤患者有啥作用？

A:针对分子标志物检测结果可以为不可手术 III 期及 IV 期患者选择靶向/免疫治疗方案；对于靶向治疗耐药后的患者，再次 NGS 检测可以更好地指导后续治疗方案的选择。

另外，NGS 对肿瘤治疗耐药信息提示、肿瘤复发风险分层、家族遗传信息等方面也有相关应用。

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NGS 检测过程中组织标本无法获取或不足时怎么办？

A:基因检测组织样本不足或组织检测失败时，经过分析验证和临床验证的脑脊液/胸腔积液或血液样本检测平台可作为辅助或补充。

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NGS 报告中证据级别怎么区分？

A:基因变异按照其临床意义的重要性分为四个等级。

I 类变异，具有A（FDA 或其他国家药监部门批准或专业临床指南（如 CSCO 诊疗指南、NCCN 临床实践指南）推荐）或 B（经具有统计学效能的临床研究（如：拟用于注册申请的关键临床研究、基于该分子标志物入组的Ⅱ/Ⅲ期临床研究）证实、获得该领域专家共识（如 IASLC 检测手册））级证据；

II 类变异，具有C（多项小型临床研究支持、已作为当前临床研究的入组标准或其他癌种的 A 级证据（跨适应证用药））或 D（疗效获益的临床病例报道支持或临床前证据支持）级证据；

III 类变异，临床意义不明；

IV 类变异，已知无临床意义。

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NGS 检测结果均是阴性，患者感到疑惑或不满，该如何解读？

A:出现阴性的情况有两种。

（1）真阴性：从患者的基因层面来看，的确没有合适的靶向药物及免疫治疗等；

（2）假阴性：评估患者送检的样本是否合格，如果样本本身不合格，会造成假阴性；选择的 NGS panel是否与患者的肿瘤类型相匹配，即该肿瘤常见变异是否能被该 panel 覆盖。

另外由于肿瘤存在时空异质性，送检样本里可能未包含临床意义明确的突变信息。

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NGS 检测结果不一致，如何解释？

A:导致结果不同的原因可能包括：肿瘤标本异质性，不同平台操作流程的差异，对于基因突变检测种类不同，对于最低丰度检测值不同（Mutant allele frequency，MAF），空间和时间因素，治疗间隔差异，亚克隆，潜在的生殖细胞 DNA 污染等。

研究中发现，当最低检测限阈值设定较低时检测结果一致性较差。当待测基因的MAF 值在10%和5%时，不同平台间重复性较好，当MAF为1%时，检测结果的一致性较低。

临床上需要根据具体情况综合分析。

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NGS 检测结果阴性，可以盲吃靶向药物吗？

A:临床上一般不建议盲吃靶向药。首先考虑选择其他治疗方案；如果无更好的治疗方案时，建议用新样本进行检测。

例如送检的是血液样本（检测 ctDNA），建议重新取组织进行检测；但是鉴于临床的实际可行性及复杂性，有时候患者取不到新样本，最终的治疗方案建议多方面综合考虑。

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检测结果显示无可用药物时，可以跨癌种用药吗？

A:不建议跨癌种用药。建议结合患者临床信息及临床诊疗指南信息，全面评估制定治疗方案。

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检测出的基因突变频率已经达到 30% 以上，为何后面未给出相关用药提示？

A:基于数据库信息显示，目前该类基因相关的突变位点还没有相关的靶向药物和临床试验信息，即表示该类突变目前无临床意义、尚未发现其具体临床意义或暂无相关药物匹配信息。

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报告里出现突变基因（如肺癌 NGS 报告列表里出现了 ALK 或 ROS1 突变、食管癌 EGFR 基因扩增），为什么却没有用药提示？

A:不同疾病出现的基因突变形式不一样（即使是同一基因），如肺癌靶向治疗提示是 ALK 或 ROS1 重排，而不是点突变；肺癌 EGFR 基因是突变，而食管癌中 EGFR 常见的是扩增，因此，食管癌中就没有 EGFR-TKI 用药推荐。其他癌种同理。

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GNS 报告里有敏感的药物和耐药的药物，是否可以考虑用敏感的药物？

A:常规用药可以选择敏感药物，少部分突变需要借助相关文献及用药信息综合选择。

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NGS 检测可以筛查家族遗传疾病吗？

A:可以。目前有部分基因遗传性疾病可以通过 NGS 技术筛查。

如：林奇综合征可以筛查有无 MLH1、MSH2、MSH6、 PMS2 四个基因的遗传缺陷，基因诊断已成为林奇综合征的 「金标准」。

遗传性息肉病性结直肠癌综合征可以做APC 基因检测帮助诊断。

遗传性乳腺癌-卵巢癌综合征可以通过筛查 HBOCS 与 BRCA1/2 基因突变帮助诊断。

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健康人检测携带遗传变异信息，一定会患病吗？

A:单从某一个人的信息来看，大多无法确定该变异与疾病的关联，需要结合家族成员验证信息综合评定。与普通人群比较，对于有肿瘤家族史的人群，若携带致病突变，其罹患肿瘤的风险会明显上升，且不同类型的致病突变，其患病风险不同。

✩ 本文仅供医疗卫生等专业人士参考

策划：GoEun，梅浙

题图来源：站酷海洛PLUS

参考文献

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3.Pisapia P, Malapelle U, Roma G, et al. Consistency and reproducibility of next-generation sequencing in cytopathology: A second worldwide ring trial study on improved cytological molecular reference specimens. Cancer Cytopathol. 2019; 127(5): 285-296.

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5.二代测序临床报告解读专家组. 二代测序临床报告解读指引. 循证医学, 2020, 20(4): 193-202.