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作者：

赵雪

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摘要：

在畜牧业生产实践中,往往需要人为控制家畜的性别及比例,加速优良品种繁育,扩大优良母畜的利用率,因而,牛早期胚胎性别鉴定就成了人们关注的研究课题.目前的研究主要集中于在传统的细胞遗传学基础上,运用分子生物学等先进手段提高牛早期胚胎性别鉴定的准确率和鉴定速度,以满足生产实际的需要. 本试验以牛全血为试验材料,提取基因组DNA,采用PCR技术扩增牛Y染色体特异性DNA片段,优化性别鉴定的PCR条件,同时利用PCR技术对牛SRY基因进行扩增,克隆和序列分析,为PCR法鉴定牛早期胚胎性别用于生产实践打下研究基础.本试验取得了以下结果: 1.建立了提取高质量牛基因组DNA的方法. 2.确定了进行牛早期胚胎性别鉴定的连续复合PCR技术,即在双引物的存在下,实现了两种基因片段的同时扩增;确定了PCR的最佳反应条件,先在反应体系中加入一对Y—特异性引物扩增一段时间,再加入牛特异性引物继续进行扩增,保证了性别鉴定的强特异性和高敏感性,使性别鉴定过程在2个小时内可以完成.牛胚胎性别鉴定的鉴定率为95.24%.建立了一种行之有效的鉴定牛早期胚胎性别的PCR方法. 3.利用PCR技术扩增出牛SRY基因并对其进行了克隆和序列分析.以公牛全血基因组DNA为模板,在一对特异性引物的引导下,确定出PCR反应的最佳条件.得到的PCR产物使用UNIQ—10柱式DNA胶回收试剂盒进行回收和纯化,然后将该片段连接到pMD-18T载体上,转化感受态大肠杆菌,提取质粒DNA进行鉴定和序列测定.本试验扩增的牛SRY基因由2713个核苷酸组成,与NCBI中公布的牛SRY基因进行比较,上游的同源性为98.7%,下游的同源性为98.1%.与其他物种同源性比较结果显示,SRY基因有一定的同源性,说明SRY基因在物种进化过程中有一定的保守性,同时也有一定的变异,为设计具有针对性的特异性引物提供了依据,可以使性别鉴定的准确性和特异性得到保证.

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关键词：

牛 胚胎 性别鉴定 PCR SRY基因