2021年最新最全“PCR异常曲线”分析! |
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如果设置都正确,耗材及配件也都没问题,但是扩增曲线还是异常,这时候要确定下所用试剂是否正常。 首先要确定试剂是否有效,包括查看试剂是否在有效期内,是否反复冻融多次,运输条件是否正常。可以通过比较试剂的批次号,结合实验中的阳性对照结果,确定试剂的有效性。其次要观察扩增完的试剂体积,如果在扩增过程中有试剂的蒸发,可能会引起扩增曲线抬升现象,如果实验体系中加入了ROX作为参比荧光,ROX荧光可以区分扩增曲线抬升是真扩增,还是蒸发。 比如反应体系存在蒸发,水分丢失,ROX浓度会增加,ROX参比荧光上抬(图九左图),而正常孔中ROX荧光会一直不变(图九右图),所以在加完试剂上机前,一定要检查耗材是否已经密封,防止试剂蒸发,试剂蒸发严重的还可能导致整个实验室的气溶胶污染。 |
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