前置知识

Roche LightCycler® 96仪器的使用与软件并无太大的差别，日常操作常用仪器进行设置上机即可，数据分析用电脑软件则更为方便，故而此次分享实操环节以仪器为主，数据分析则以软件为主。

上机步骤

1 上机前的准备工作：

加完样后一定要离心！一方面是去除气泡，另一方面是让反应体系充分混合，忘记离心会造成很大的误差哦；

2 开机：

打开仪器背面的电源，仪器显示屏如图1-1所示，左上角的Initializing代表正在初始化，此过程一般需要3分钟左右（注意：此时仪器不能运行，但可以开始设置，所以程序设置可在此步进行）；

待左上角显示Ready时，即为可用状态，如图1-2所示；

图1-1 

图1-2

3 程序设置：

等待仪器准备就绪的过程中就可以率先进行程序设置，步骤如下：

A 命名文件：

点击New即为新建，显示屏如图2所示，“New empty experiment”意思是新建一个空白程序，也就意味着文件名和程序均需新建；

“New experiment based on existing experiment”意味着只需要新建一个文件名即可，而程序就会按照之前我们设置过的程序运行，并不改变原有程序（多次跑PCR这个功能就很方便啦，仅需改文件名即可）；

“New experiment based on Roche Template”是仪器的默认程序，也可以选它再按照试剂说明书进行修改，一般不常用；命名结束后，点击“Create”即可开始程序设置；

图2

B 设置程序（电脑软件和仪器均可，此处以仪器为例进行设置）：

点击“Create”后返回图3-1所示界面，“Measurement”→“Reaction Volume”（反应体系设置，常用20ul，具体情况按实验设计进行修改）；

点击书写按钮（实验方法设置，常用SYBR GreenⅠ，视情况而定），如图3-2所示；点击“Back”即可设置成功；

进而点击“Profile”选择扩增方法，两步法还是三步法视实验情况而定，如图3-3所示（当然不能忘记添加“Melting”和“Cooling”哦）；

添加完毕后，界面切到图3-4所示界面，同样点击书写按钮就可以按照试剂说明书进行循环数、反应时间、温度等一系列设置咯！

点击“Back”即完成所有程序设置；

图3-1 

图3-2

图3-3

图3-4

4 上机与运行：

点击“Eject”，即可打开舱门，放入样本，关上舱门；

点击“Start”即可开始运行，运行过程中左上角显示“Running +你的文件名”，结束后显示“Ready”即为反应结束；

5 数据拷贝：

将U盘插入仪器侧方U盘插口中，点击“Synchronization”即可完成数据拷贝；

6 关机：

点击“Eject”弹出舱门，拿出样品后关好舱门，点击“Exit”→“Shut down”，待显示屏变黑后关闭电源即可，如图4-1、4-2所示。

图4-1

图4-2

软件操作与仪器大同小异，不再赘述。

注意事项

环境温度：要确保环境温度在15-30℃，且不可遮挡仪器散热口影响散热；

上机前样品一定要离心，且不可污染管盖或封板膜；

样品最好对称放置，不然有可能造成仪器卡顿；

为尽量避免边缘效应，样品最好放中间（罗氏96的性能还算稳定，边缘效应并不明显）；

为延长仪器使用寿命，最好配备稳压器，以防突然断电或电压不稳造成仪器的损坏；

所选用的仪器耗材需要与PCR仪匹配；

开关机一定要严格按照顺序来，否则会导致黑屏，损坏仪器

文稿：夏沫梦鸢

校对：煲仔饭

素材：Canva

参考资料：

https://diagnostics.roche.com/global/en/products/instruments/lightcycler-96-instrument-ins-2691.html

扫码添加客服小姐姐

免费兑换1门实验课程&领取128页实验资料