最近好几个还在学校做科研的朋友跟我吐槽一份全面严谨的protocol太难找了！平时做实验踩不完的坑，结果阴性还不知道怎么找原因…硕博开题中期因为实验细节被专家批，毕业论文盲审让专家揪着实验结果不放…连国自然标书，因为一处动物模型写错，直接导致砖家给了个C！

其实，即使这么繁多的实验类型，试剂品牌和实验步骤，想要摸索出一套严谨可行的protocol也不难，小编厚着脸皮，花了一顿火锅，特意求某个在中科院混迹多年的实验达人小姐妹给大家准备了一份诚意满满的实验protocol！Protocol不知道咋做看这份就够了！

01. 常见细胞动物实验技术总结！

细胞培养、流式细胞术、动物模型等

02. 3种不同实验方法全流程、标书毕业论文都能用上（300页+）！

①表型确认

表达检测：高通量、核酸水平、蛋白质水平

正反回复 ：分子克隆、基因沉默敲除、基因突变、载体工具

实验模型：细胞模型、动物模型

表型验证：细胞增殖、糖酵解、纤维化等

②细胞交互

外泌体：外泌体（抽提).pdf、外泌体(电镜).pdf、外泌体（示踪）.pdf

免疫细胞：Th1 Th2平衡.pdf、Terg Th17平衡.pdf ③分子机制

下游分子通路：9条常见信号通路的标志物总结、信号通路关键分子和抑制剂.pdf

Rescue实验：回复实验策略.pdf

基因在细胞中的定位：蛋白亚细胞定位、核酸亚细胞定位、染色体定位、细胞典型标志物.pdf

直接作用机制：蛋白-蛋白、蛋白-RNA、蛋白DNA、RNA-RNA、结合位点研究、分子装饰、可变剪

03. 写标书必备：不同研究水平实验技术protocl合集！

实验Protocol

①DNA技术 质粒DNA的提取.pdfSSR分子标记实验操作及其注意事项.pdf基因定点突变.pdfSouthern Blot原理及实验方法.pdf凝胶迁移实验(EMSA) .pdf重组质粒的连接、转化及筛选.pdf染色质免疫共沉淀(ChlP)实验.pdf单核苷酸多态性(SNP)实验.pdfcDNA文库构建.pdf甲基化检测原理及步骤.pdf动物基因组DNA的提取.pdf

②PCR技术 PCR产物的TA克隆28DNA的胶回收和连接29.pdfddRT-PCR28差示反转录PCR29.pdfPCR-SSCP实验操作详细步骤.pdf聚合酶链式反应28PCR29基本操作步骤.pdf目的基因PCR扩增产物的克隆.pdfAFLPI原理和操作.pdf逆转录-聚合酶链反应28RT-PCR29.pdf菌落PCR.pdf实时荧光定量PCR具体实验步骤.pdf限制性片段长度多态性实验(RFLP) .pdf降落PCR.pdf重叠延伸PCR实验.p

③RNA技术 mRNA的分离纯化.pdf石蜡切片28苏木精-伊红对染法29.pdfsiRNA表达载体的构建.pdfRNA干扰实验.pdfNorthern Blot原理及实验方法.pdfTrizol法提取总RNA.pdf原位杂交实验.pdf荧光原位杂交实验(FISH) .pdfRNA琼脂糖凝胶电泳.pdf

④蛋白质技术蛋白质含量的测定.pdf免疫组化实验.pdf病毒感染细胞实验整体流程及原理.pdfwestern blot详细操作步骤.pdf等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点.pdf双向电泳操作步骤及相关试剂配制.pdf蛋白质的表达、分离、纯化实验.doc.pdf免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤.pdfELISA步骤、试剂及注意事项.pdf蛋白质胶的制备.pdf

⑤感受态技术感受态细胞制备及转化实验(全) .pdf农杆菌感受态细胞的制备与转化.pdf真核细胞转染操作方法.pdf细胞转染操作方法及各方法比较.pdf毕氏酵母%28Pichia_pastoris%29感受态细胞制备及转化...质粒转染实验步骤.pdfIPTG诱导蛋白表达的l原理及方法步骤.pdf大肠杆菌感受态细胞制备实验(CaCl2法) .pdf大肠杆菌转化实验(热击法).pdf

⑥细胞技术 流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程.pdf细胞凋亡检测方法汇总..pdf原代细胞培养与分离.pdf细胞周期测定实验.pdf细胞迁移实验28细胞划痕法29.pdfT淋林巴细胞分离技术.pdf细胞增殖检测MTT法.pdf细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏.pdfTUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法.pdf原代细胞培养和传代培养的方法.pdfMTT法测定细胞相对数和相对活力.pdfB淋巴细胞分离技术.pdf

如果当初在研究PCR时，能针对这些问题有一个系统的学习和解答，快速出“新手村”就好了。

在和同学们交流的过程中，我发现大家普遍遇到的问题有：

不知如何有效设计引物；

PCR电泳无扩增条带；

扩增产物不符合要求；

条带总和你玩“捉迷藏”……

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1.从文献提炼实验套路的能力

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2.快速通关PCR

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PCR产物出现假阳性（即空白对照出现目的扩增产物）怎么办？

PCR产物中出现假阴性或无扩增产物（即阳性对照中有条带，而样品则无条带）怎么办？

提高PCR特异性的策略有哪些？

克隆PCR产物的最优条件是什么？

没有回收到目的片段，需要做什么对照实验？

对照实验结果好，却没有回收到目的片段，实验出了什么问题？

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不同实验方法全流程

表型确认

WB实验流程、注意事项、数据处理及写作

IHC实验流程、操作技巧、注意事项、图像分析等