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 at five thirty

聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，

聚合过程由自由基催化完

成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法（常用）和光聚合法。

PAGE

根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类。

连续系统电泳：

体系中缓冲液

pH

值及凝胶浓度相同；

带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。

不连续系统：

由于缓冲液离子成分、

pH

、凝胶浓度及电位梯度的不连续性；

带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，

分子筛效应，

还具有浓缩效应，

因而其分离条

带清晰度及分辨率比连续系统电泳的较好。

不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。

浓缩胶

是由

AP

催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为

pH6.7

的

Tris-HC1

。

分离胶

是由

AP

催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为

pH8.9 Tris-HC1

。

电极缓冲液

是

pH8.3 Tris-

甘氨酸缓冲液。

2

种孔径的凝胶、

2

种缓冲体系、

3

种

pH

值使不连续体系形成了凝胶孔径、

pH

值、缓

冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。

SDS-PAGE

各试剂作用

1. 

过硫酸铵（

APS

）

为催化剂

2. 

四甲基乙二胺（

TEMED

）

为加速剂：

在聚合过程中，

TEMED

催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时

甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构

3. 

SDS

是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分

子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。

4. 

强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。

在样品和凝胶中加入还原剂和

SDS

后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和

SDS

结合成蛋白

- SDS

胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不

同分子间的电荷差异和结构差异。

5. 

聚丙烯酰胺——为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促

凝剂及环境密切相关；

制胶缓冲液选择

tris

－

HCL

系统；

AP

——提供自由基；

TEMED

——催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；

十二烷基硫酸钠

（

SDS

）

——阳离子去污剂，

作用：

去蛋白质电荷、

解离蛋白质之间的氢键、

取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。

6. 

7. 

8. 

9. 

10. 

11 

12.