茉莉酸（Jasmonate,JA）是重要的植物激素，能够引发植物对病虫害的防御反应，同时也影响很多植物发育进程，比如青花素的积累，雄蕊的发育，根的伸长，根毛的发育，植物的衰老等。在模式植物拟南芥中，信号负调控因子JAZ蛋白是茉莉酸信号传导通路中的核心因子。在没有茉莉酸的情况下，JAZ能够与MYC家族转录因子（MYC TFs）互作，抑制MYC TFs的转录激活活性，进而抑制下游的JA响应基因的表达；而在JA存在的情况下，JA受体F-Box家族蛋白COI1会将JAZ降解，从而释放MYC TFs，并激活下游的JA响应基因的表达，从而引发广泛的JA诱导反应（Xie et al.,1998）。

MYC TFs是JA信号通路中最重要的转录因子，能激活很多下游基因的表达，并产生各种各样的JA诱导反应。JAZ抑制MYC TFs转录激活活性有两个途径：首先，JAZ能够阻止MYC TFs和转录共激活因子（Co-activator）MED25的互作，MED25能够招募RNA聚合酶II（RNA polymerase），并激活下游基因的表达（Zhang et al., 2015, 2017; An et al., 2017）。另外一条途径是：JAZ能够通过招募转录共抑制因子（Co-repressor）TPL（TOPLESS）或者TRP到MYC TFs的下游基因，TPL或者TRP能够通过表观调控的方式改变下游基因的染色质结构，从而抑制下游基因的表达（Pauwels et al., 2010）。JAZ招募TPL或者TRP需要与接头蛋白互作。研究显示，NINJA (Novel Interactor of JAZ)能作为接头蛋白，同时与JAZ和TPL互作，帮助JAZ招募TPL，抑制MYC2的转录激活活性。然而，NINJA的作用主要发生在植物的根部，因为相比于根部，ninja突变体在地上部分的表型不是很明显。这说明，可能存在着其它的接头蛋白，帮助JAZ蛋白招募转录共抑制因子TPL或者TRP。

青花素是一类小分子次级代谢产物，具有抗氧化的作用，植物通过合成青花素渡过不良环境，已经证明，一系列的转录因子，包括WD repeat，MYB，MYC等能形成复合物调控青花素的合成（Zheng et al., 2019）。而JA参与了对这些转录因子活性的控制，JAZ能和WD repeat/MYB/MYC蛋白复合体中的许多关键成分互作，并通过招募转录共抑制因子TPL，抑制WD repeat/MYB/MYC蛋白复合体的活性（Qi et al., 2011）。然而青花素主要在地上部分合成，NINJA并不能作为JAZ的接头蛋白参与拟南芥的JA诱导型青花素合成的调控。那么是否存在NINJA之外的JAZ接头蛋白，介导JAZ与转录共抑制因子TPL或者TRP的互作，并抑制下游青花素合成基因的表达，仍然不清楚。

近日，Molecular Plant 在线发表了中国农业大学傅缨课题组题为Arabidopsis ECAP is a New Adaptor Protein that Connects JAZ Repressors with TPR2 Co-repressor to Suppress Jasmonate-Responsive Anthocyanin Accumulation的文章，报道了一种新的接头蛋白ECAP，能连接JAZ和转录共抑制因子TRP2，并抑制JA响应的青花素积累。

本研究中，作者在拟南芥T-DNA插入突变体库中，找到了两个青花素含量很高的突变体，ecap-1和ecap-2，研究发现，这两个突变体都在三号染色体上的At3G58110外显子处有T-DNA的插入。At3G58110编码一个功能未知蛋白，通过亚细胞定位，发现该基因编码的蛋白定位于细胞核。序列分析显示，在其编码蛋白的374-379aa处有一个EAR结构域，EAR结构域在很多著名的转录抑制因子中都存在，如IAA（INDOLEACETIC ACID-INDUCED PROTEIN），NINJA，AFP（ABI FIVE BINDING PROTEIN）。一般认为，EAR结构域能够招募转录共抑制因子TPL或者TRP，从而抑制下游基因的表达。

作者将ecap-2分别和拟南芥JA受体突变体coi1-1，JA合成突变体opr3进行杂交，获得ecap-2/coi1-1和ecap-2/orp3两个双基因突变体，通过研究JA处理和不处理条件下，这些突变体的青花素积累结果，发现ECAP同时拥有COI1依赖型和COI1不依赖型两种调控青花素积累的能力。

作者将ecap-2和野生型的拟南芥分别进行了RNA seq，结果显示，很多早期JA响应基因（early JA responsive genes）在ecap-2中上调表达，其中包括一些青花素合成基因，如MYB75，TT8，DFR，UF3GT，DFR，ANS等。同时，作者还将GFP-ECAP和GFP-ECAPmEAR(EAR结构域突变的ECAP)在野生型拟南芥Col中进行了过表达，发现青花素合成基因ANS在GFP-ECAP过表达植株中明显下调，而在GFP-ECAPmEAR却没有发生变化。这说明，ECAP通过其EAR结构域，抑制JA响应的青花素合成基因的表达。

由于ECAP是定位于细胞核的含有EAR结构域的JA信号抑制因子，因此，作者怀疑ECAP可能是JAZ的接头蛋白。基于这个假设，作者利用ECAP作为诱饵蛋白，进行了酵母双杂交筛选，结果发现ECAP能够和JAZ家族的JAZ6，JAZ8互作。一系列的体内体外蛋白互作实验，如CoIP，pulldown，BiFc，LCI都证明了他们的互作。作者用Crispr Cas9技术，创制了JAZ6和JAZ8的突变体jaz6和jaz8，并证明了JAZ6和JAZ8确实参与了JA诱导的青花素合成。另外，通过杂交，作者创制了ecap/jaz6，ecap/jaz8以及ecap/jaz6/jaz8等双基因以及三基因突变体，结果显示，这些双基因和单基因突变体的青花素积累量与ecap单基因突变体的积累量相似，且都明显高于野生型，因此JAZ6和JAZ8都是通过ECAP来调控JA响应的青花素合成。

另外，研究结果显示，转录共抑制因子TPL或者TRP一般是通过诱导组蛋白去乙酰化来抑制下游基因的表达的（Pauwels et al., 2010）。作者研究了ecap和野生型拟南芥中青花素合成基因ANS（ECAP的下游基因）的H3K9AC修饰，结果显示，在JA存在情况下，ecap中ANS的H3K9Ac的丰度显著高于野生型，这意味着，ECAP可能作为接头蛋白，帮助JAZ6和JAZ8来招募转录共抑制因子TPL或者TRP。为了进一步证明这一点，作者还用酵母双杂交，研究了ECAP和所有已知的转录共抑制因子的互作，结果显示，ECAP和TRP2能够发生蛋白互作。作者又用Crispr Cas9创制了TRP2的突变体trp2，表型分析结果显示TRP2确实参与了JA响应的青花素合成调控。因此，证明了ECAP作为接头蛋白，介导了JAZ6，JAZ8和TRP2的互作，共同调控JA响应的青花素合成。

1.An, C.P., Li, L., Zhai, Q.Z., You, Y.R., Deng, L., Wu, F.M., Chen, R., Jiang,H.L., Wang, H., Chen, Q., et al. (2017). Mediator subunit MED25 links the jasmonate receptor to transcriptionally active chromatin. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 114: 8930-8939. 2.Pauwels, L., Barbero, G.F., Geerinck, J., Tilleman, S., Grunewald, W., Perez, A.C., Chico, J.M., Bossche, R.V., Sewell, J., Gil, E., et al. (2010). NINJA connects the co-repressor TOPLESS to jasmonate signalling. Nature 464: 788-791. 3.Qi, T., Song, S., Ren, Q., Wu, D., Huang, H., Chen, Y., Fan, M., Peng, W., Ren, C., and Xie, D. (2011). The Jasmonate-ZIM-domain proteins interact with the WD-Repeat/bHLH/MYB complexes to regulate Jasmonate-mediated anthocyanin accumulation and trichome initiation in Arabidopsis thaliana. The Plant cell 23: 1795-1814. 4.Xie, D.X., Feys, B.F., James, S., Nieto-Rostro, M., and Turner, J.G. (1998). COI1: an Arabidopsis gene required for jasmonate-regulated defense and fertility. Science 280: 1091-1094. 5.Zhang, F., Yao, J., Ke, J., Zhang, L., Lam, V.Q., Xin, X.F., Zhou, X.E., Chen, J., Brunzelle, J., Griffin, P.R., et al. (2015). Structural basis of JAZ repression of MYC transcription factors in jasmonate signalling. Nature 525, 269-273 6.Zheng, T., Tan, W., Yang, H., Zhang, L., Li, T., Liu, B., Zhang, D., and Lin H. (2019). Regulation of anthocyanin accumulation via MYB75/HAT1/TPL-mediated transcriptional repression. PLoS Genet 15:e1007993.