补体经典途径的激活是通过补体蛋白C1q与细胞表面靶抗原结合的免疫球蛋白Fc区结合而启动的，接着C2-C9就被激活形成攻膜复合物对靶细胞发挥裂解效应。许多抗肿瘤抗体都可以引起CDC作用，如抗CD20、CD52、CEA等抗体。

C1q的结合能力以及由此产生的CDC活性都会影响抗体药物的安全性和有效性，因此需要在抗体开发过程中对其进行表征。基因工程改造IgG抗体的Fc区是目前热门的研究领域，以提高或者降低生物药招募补体的能力。

区别于传统的测定CDC相互作用的技术，PerkinElmer开发了HTRF均相检测IgG抗体与C1q结合检测试剂盒。

HTRF Human C1q Binding assay

不需要将抗体固定，该检测方法以均相的形式能够简单快速的检测IgG抗体FC区与人C1q蛋白的结合。

实验原理

如图所示，生物素化的抗人IGf Fab抗体与链霉亲和素复合物用于捕获溶液中的待检抗体。采取夹心法检测与人Cq1蛋白结合的抗体—标记了能量供体（Eu）的抗C1Q抗体与标记了能量受体（d2）的链霉亲和素。当供体与受体靠近时，用光源(激光或闪光灯)激发供体，触发荧光共振能量转移(FRET)至受体，从而在特定波长(665 nm)发出荧光。信号强度与抗体Fc区域与人C1q相互作用的能力成正比。

该检测方法嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体以及IgG1、IgG2和IgG4同型抗原均能检测。

操作步骤

实验操作步骤简便且无需清洗，并可在96潜孔板以及384孔板中进行（终体积20µL）。在连续添加完实验试剂后，仅需孵育步骤就可检测信号，该信号在48h内保持稳定。可以根据需要按比例调整每种试剂的体积后进一步减小或者扩大实验体系。

实验结果

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