HE染色法常见问题及应对措施

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HE染色法常见问题及应对措施

2024-06-27 09:11| 来源: 网络整理| 查看: 265

对策:适当稀释伊红染色液,减少伊红染色时间,或者使切片在乙醇脱水等步骤时,停留时间相对均匀。同样,也要检查切片的厚度是否合适。

7、切片中出现蓝黑色沉淀物

原因:苏木精染色液中的金属膜,黏附在玻片上。

对策:每天染色前仔细过滤苏木精染色液,或建议使用半氧化苏木精染色液,如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。

8、显微镜下见切片内有大量水珠

原因:切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水,导致二甲苯透明中性树胶封固后残留大量水分。

对策:移去盖玻片,用二甲苯溶解封固剂如中性树胶。将切片置入新鲜的无水乙醇中,待切片重新脱水完全后,用新二甲苯透明,中性树胶封固。所有用于脱水和透明的液体,在使用一定时间以后,应即时更换。

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9、光镜下切片某些区域难以聚焦

原因:盖玻片上可能有封固切片的封固剂。

对策:移去盖玻片,重新用干净的盖玻片封片。

10、封固剂从盖玻片与载玻片之间的缝隙回缩

原因:(1)盖玻片弯曲或不平整;(2)封固剂含二甲苯过多,稀释过度。

对策:移去盖玻片,重新找一张盖玻片,用干净的封固剂封片。每天保证盛装封固剂的容器密封性良好,在封固结束的时候盖紧盖子。尽量使用小的容器盛装封固剂,一旦封固剂太粘稠,就可以废弃不再使用。

11、切片从脱蜡的二甲苯经过梯度乙醇进入水溶液时,水和玻片呈现乳白色混浊改变

原因:用于脱蜡的二甲苯没有被乙醇洗干净。

对策:更换洗涤二甲苯的乙醇液体,把切片重新放回无水乙醇,脱去玻片上的水分。

12、细胞核灰蓝

原因:(1)组织处理温度过高、过热,在石蜡停留的时间过长;(2)固定时间太短,接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。

对策:理论上来说,加热处理仅在组织浸蜡步骤才使用,组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理,完成浸蜡处理后的组织,可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中,冷却凝固,以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好,脱水最好能从低浓度的乙醇开始。

13、切片中出现类似色素样的点状结晶和黑色光滑的细胞核

原因:切片封片前放置在空气中时间太长,以至于二甲苯挥发切片干燥所致。

对策:移去组织切片上的盖玻片和封固剂,重新处理。将切片水洗数分钟,然后重新脱水、透明、封固。封片过程中要保持组织切片的轻度湿润,尽量不要让其干燥。

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