蛋白分析的第一步是蛋白提取，这就需要释放不同来源样品中的蛋白质。无论通过机械处理还是基于去垢剂的提取方法，都会不可避免地破坏细胞稳态，导致蛋白降解或不稳定。因此，提取过程中蛋白的完整性直接决定了下游蛋白样品分析所得数据的质量。例如，某些提取方法可能在细胞裂解和细胞内含物的溶解方面有效，但可能会导致蛋白变性，影响天然蛋白相互作用的检测和分析。

NE-PER™ 细胞核和细胞质提取试剂

货号：78833

本产品可逐步裂解细胞，并从基因组 DNA 和 mRNA 中提取出细胞核蛋白。

Mem-PER™ Plus 膜蛋白提取试剂盒

货号：89842

与原始的Mem-PER试剂盒相比，本方案更简单，组分可兼容许多下游应用

培养的哺乳动物细胞，哺乳动物组织和原代细胞是生理相关的内源性蛋白（包括翻译后修饰）研究，以及过表达系统（瞬时或稳态）的常见样品来源。当提取哺乳动物组织中的蛋白质时，需要一些温和的酶或机械破碎手段来帮助从较复杂组织基质中分离细胞。对于仅通过质膜将细胞内容物与环境隔离开的培养哺乳动物细胞和原代细胞来说，试剂中的去垢剂可打破蛋白-脂质膜双层结构，使总蛋白提取更为容易。通常所研究的或用于重组蛋白表达系统的其他生物体包括细菌、酵母和植物。这些细胞类型含有细胞壁，需要额外使用酶解或机械破碎的方法才能有效释放蛋白。然而，目前已开发出基于去垢剂的解决方案，可有效提取和溶解这些细胞中的蛋白，而无需机械外力破坏。该方法对于处理更多样品数量或使用自动提取和纯化方案来说尤其重要。

对于大多数研究来说，只需直接制备全细胞裂解物以获取可溶蛋白样品，用于下游直接检测或进一步纯化与分离。但是，如果在蛋白提取之前将细胞分为不同的区室或细胞器，可以显著提高特定蛋白的产量或富集率。机械裂解通常会破坏所有细胞区室，使分离特定细胞组分变得更加困难。但是，通过谨慎优化试剂，已开发出基于逐级差异去垢剂的方法来分离核蛋白、胞质蛋白和膜蛋白组分。该方法可以将疏水性膜蛋白溶解，使其与亲水蛋白分离，并且可以分离完整细胞核、线粒体和其他细胞器，用于直接研究或分步提取蛋白。

样品来源或样品类型。收集样品时的常用蛋白来源可能包括哺乳动物细胞培养物、组织或体液等天然来源。此外，蛋白也可能在表达系统（例如酵母、细菌、昆虫或哺乳动物细胞）中过表达。

蛋白制备决策树。该图描述了选择特定蛋白分离方法时涉及的考虑因素。

蛋白样品制备流程。该工作流程首先是进行细胞裂解，样品制备涉及的步骤实现了将含有组分的蛋白从起始生物来源转变为均质溶液，同时保留蛋白的体内状态。获得高品质裂解物对于成功进行下游应用来说至关重要。

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