技术总结本发明公开了一种双sgRNA表达质粒及其文库的构建方法。本发明所提供的方法一是利用两轮golden gate拼装技术，将预先设计在寡核苷酸上的编码双sgRNA中的间隔RNA的DNA片段插入到载体中；方法二是利用三轮golden gate拼装技术构建随机双敲除sgRNA表达质粒文库。本发明所提供的构建双sgRNA表达质粒文库的方法与现有方法相比，操作更加简便且大大缩短了构建时间。本发明对于鉴定非编码区基因的生物学功能以及鉴定基因与基因的相互作用具有重要意义。

技术研发人员：谢震;马大程受保护的技术使用者：清华大学;北京合生基因科技有限公司技术研发日：2017.04.20技术公布日：2017.08.25