BDNF(BDNF)靶点介绍及实验小贴士

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BDNF(BDNF)靶点介绍及实验小贴士

2024-03-22 17:49| 来源: 网络整理| 查看: 265

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图一:BDNF蛋白结构。图片来源:SWISS-MODEL。BDNF靶点介绍蛋白功能蛋白表达蛋白定位异构体 & 翻译后修饰

​WB实验贴士注意事项阳性对照结果示例关键控制点参考文献

BDNF靶点介绍蛋白功能

   BDNF是神经营养蛋白家族成员之一,并且已知其会影响神经元的生长,发育,分化和存活。

   BDNF是成人突触传递和可塑性的主要调节因子。

   BDNF在神经发育过程中,促进周围和中枢神经系统特定神经元群体的存活和分化,参与轴突生长,发育以及树突细胞生长和形态的调节。

   前体proBDNF和成熟mBDNF对长时程增强和长时程抑制具有相反的作用。

蛋白表达

   BDNF在海马,杏仁核,大脑皮层和小脑等脑组织中高度表达。

   BDNF也表达于心脏,肺,骨骼肌,睾丸,前列腺和胎盘中。

蛋白定位

   分泌型蛋白

图二:BDNF靶点ICC实验结果图,Anti-BDNF antibody [EPR1292] (ab108319)。绿色:BDNF,红色:Tubulin,蓝色:DAPI。异构体 & 翻译后修饰

   人    (P23560):异构体1-5:28-37 kDa (预测)

   小鼠 (P21237):异构体1-2:28-29 kDa (预测)

   大鼠 (P23363): 28 kDa (预测)

   前肽被N-糖基化和糖基硫酸化。

   通过纤溶酶(PLG)转化为成熟的BDNF。

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WB实验贴士注意事项由于BDNF存在不同异构体和翻译后修饰,以及成熟、非成熟形式的BDNF,在WB实验中可能会出现多条条带。 不同样本中BDNF蛋白的形式和含量可能存在区别,最终观察到的条带大小为15-45 kDa是合理的。 ~15 kDa可能是单体成熟形式(加工)的BDNF ~28 kDa可能是二聚体成熟形式(加工)的BDNF ~35 kDa,~45 kDa可能是不成熟形式(未加工/前体)的BDNF 阳性对照

   重组人/小鼠/大鼠BDNF蛋白(ab9794)

   人,大鼠和小鼠的脑,海马和小脑组织裂解液

结果示例

图三:WB- Anti-BDNF antibody [EPR1292] (ab108319)。一抗:使用ab108319,浓度1/1000。          封闭:使用Licor封闭液。泳道1:人海马组织裂解液  泳道2:大鼠海马裂解液  泳道3:小鼠海马裂解液预测条带大小:15 kDa图四:WB- Anti-BDNF antibody [EPR1292] (ab108319)。一抗:使用ab108319,浓度1/1000。           泳道1:人脑组织裂解液   泳道2:小鼠脑组织裂解液   泳道3:大鼠脑组织裂解液泳道4:人海马组织裂解液   泳道5:大鼠海马组织裂解液   泳道6:小鼠海马组织裂解液泳道7:人小脑组织裂解液   泳道8:小鼠小脑组织裂解液   泳道9:大鼠小脑组织裂解液预测条带大小:15 kDa检测条带大小:15-45 kDa 

关键控制点

     在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:

  样本制备

     添加足够量的蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

   电泳

     对于BDNF,请使用高浓度(15%)分离胶或梯度胶进行电泳。

   转膜

     强烈建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。

   抗体孵育

     建议使用新鲜抗体,避免重复利用。

回到顶部参考文献Michael F Egan, Masami Kojima, Joseph H Callicott, Terry E Goldberg, Bhaskar S Kolachana, Alessandro Bertolino, Eugene Zaitsev, Bert Gold, David Goldman, Michael Dean, Bai Lu, Daniel R Weinberger. The BDNF val66met polymorphism affects activity-dependent secretion of BDNF and human memory and hippocampal function. Cell. 2003 Jan 24;112(2):257-69. doi: 10.1016/s0092-8674(03)00035-7.S J Mowla, H F Farhadi, S Pareek, J K Atwal, S J Morris, N G Seidah, R A Murphy. Biosynthesis and post-translational processing of the precursor to brain-derived neurotrophic factor. J Biol Chem. 2001 Apr 20;276(16):12660-6. doi: 10.1074/jbc.M008104200. Epub 2001 Jan 10.



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