常见问题  

1. Gateway和Smart方法比较及如何选择？

2. 欧易生物提供的酵母双杂文库有何特色？ SMART 文库所需 RNA 总量低，可以进行均一化处理以降低基因的冗余。既可以提供文库质粒也可以提供酵母工作液和母液。文库可以用于单杂也可用于双杂，用于双杂既可以用共转也可以用 mating 的方法筛库。 Gateway 酵母文库需要总 RNA 量较高，但是采取分离 mRNA 的方法，不经过 PCR 过程所以不会导致基因过度冗余。除了初级文库、次级文库质粒和菌液以外我们同样可以提供酵母工作液和母液。文库可以用于单杂也可用于双杂，用于双杂既可以用共转也可以用 mating 的方法筛库。

3. 如何检测文库的库容、插入片段平均长度、重组率？ 文库滴度（每毫升文库菌液库容量）的计算公式：

CFU/ml = 平板上的克隆数/平板上涂布菌液的体积 μl×n×1000μl 其中 n 是原始菌液的稀释倍数；总的文库库容（CFU）= CFU/ml ×文库菌液的总体积（ml）

插入片段平均长度：随机挑取 24 个菌落 PCR 所得到的插入片段长度的总和的平均值

重组率：根据菌落 PCR 中所有阳性插入片段的克隆在总检测克隆数中所占比例

4.送样要求有哪些？

total RNA：SMART法：≥1 µg；Gateway法：≥200 µg（OD 260/280 值应在 1.8 - 2.2 之间；Agilent 2100 score ≥ 7）

植物样本：> 5 g

动物样本：>1 g

细胞样本：>5*107 cfu

RNA 得率低或难抽提样本需酌情增多送样量