流式常用的五种缓冲液配方

2024-07-16 21:46| 来源: 网络整理| 查看: 265

进行流式分析时经常使用的五种缓冲液的基本配方。但请注意：缓冲液可能需要根据细胞类型和应用进行优化。

流式染色缓冲液（FACS缓冲液）

基本的FACS缓冲液是一种缓冲盐溶液，可用于免疫荧光染色方案、抗体稀释和细胞稀释步骤、表面染色和洗涤步骤。该缓冲液包含叠氮化钠作为防腐剂和动物血清蛋白（FBS/BSA），有助于最大程度地减少抗体的非特异性结合。

1x PBS 2-5% (v/v) FBS (或BSA) 2 mM EDTA 2 mM NaN3

注意：NaN3作为防腐剂添加。如果要对细菌进行功能测定，请使用不含NaN3的缓冲液。

破膜剂

该缓冲液可用于流式细胞内染色时破膜用。

1x PBS 0.1% (w/v) Saponin（皂苷） 2-5 % (v/v) FBS (或BSA) 2 mM EDTA 2 mM NaN3

重要提示：由于皂苷介导的细胞通透性是一个可逆的过程，因此在细胞内细胞因子染色过程中使细胞保持皂苷的存在非常重要。并请注意，务必在固定的细胞上进行破膜。

固定缓冲液

固定缓冲液可用于细胞内染色。该缓冲液还可用于保留细胞的光散射特性和荧光染色，以用于后续的流式细胞仪分析。

1x PBS 4 % Paraformaldehyde (PFA)

重要提示：用PFA固定可减少前向散射（尺寸）和串联染料荧光强度。

红细胞裂解液（10x）

该红细胞裂解缓冲液可用于从全血、组织和肿瘤细胞中快速去除红细胞，而对白细胞的影响最小。使用前，用去离子水配制新鲜的1:10工作溶液。

1.5 M NH4Cl 100 mM NaHCO3 10 mM EDTA pH7.4

重要提示：通过0.2 µm过滤器过滤该缓冲液实现无菌化，请勿高压灭菌。

Annexin V结合缓冲液

10 mM HEPES pH7.4 140 mM NaCl 2.5 mM CaCl2 （钙离子对于AnnexinV与PS的结合至关重要）

注意：请在避光、室温（而非4°C）下，在此缓冲液中孵育细胞与AnnexinV标记。

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