荧光显微镜现在是细胞生物学的重要组成部分。这种成像技术的发展改进了使用荧光显微镜收集的可视化和数据。

梭特斯托克

荧光显微镜是利用荧光和磷光研究有机或无机物质性质的光学显微镜技术。荧光主要用于细胞生物学，但也用于其他生物科学领域以及材料科学。

在生命科学中，进行荧光显微术的研究人员通常使用一种称为表荧光显微术的技术。这涉及到所需激发的光通过激发滤光器，然后通过物镜照射对象。

荧光从受试者发出，并通过与原始光源通过的相同物镜聚焦。发射的荧光通过物镜后，通过发射滤光器进入目镜，并聚焦到检测器上。

荧光显微术中使用的主要光源有四种:

当讨论使用荧光显微镜的缺点时，必须强调受试者中被荧光激发的电子会引起化学损伤，从而导致光漂白。光漂白导致荧光团失去荧光能力，这限制了荧光显微镜观察样品的时间。

荧光是弗雷德里克·赫歇尔在1845年首次发现的。他发现紫外光可以激发奎宁溶液(如补药水)发出蓝光。英国科学家乔治·斯托克斯爵士进一步研究了这一发现，他观察到，物体发出的荧光比最初激发物体的紫外光具有更长的波长。

数十年后，在20世纪初，荧光团在生物学研究中的第一次应用是染色组织、细菌和其他病原体。后来，卡尔·蔡司和卡尔·赖歇特将它发展成荧光显微镜。

荧光标记是由Ellinger和Hirt在20世纪40年代早期实现的。绿色荧光蛋白( GFP )的克隆是20世纪90年代初实现的，易于应用于荧光显微镜。

由于许多研究考察了物质的激发和发射特性，荧光显微镜现在可以非常可控的方式应用，提供非常详细的结果。

为了提高早期使用荧光显微镜时获得的图像的分辨率，在显微镜装置的光路中引入针孔孔径。设置包括将一个针孔放置在光源前面，另一个针孔放置在检测器前面。

两个孔分别聚焦发射光和激发光。这种方法被称为“双聚焦系统”，是现代共焦显微镜的基础。

旋转圆盘显微镜是一种共聚焦显微镜变体，其被开发用于减少图像采集时间和样品暴露于激光。显微镜使激光束通过包含多个针孔孔的旋转盘，允许样品上的许多点同时被照亮，以提供更高的帧频。

已经开发的另一种荧光显微镜变体是“f -光子显微镜”技术，它涉及同时吸收两个光子而不是一个光子。这种技术使得激发波长比发射波长长。

最后，使用双光子显微镜时不会产生离焦光，这意味着光漂白和光损伤更少。

上次更新时间: 2018年11月21日

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