SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

韩文军

周晓慧

生物技术教研室

一、实验目的

了解电泳实验原理

掌握电泳实验操作规程

学习用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理与技术

二、电泳的基本原理

电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。

三、电泳的分类

从原理上：区带电泳，移界电泳，等速电泳，等电聚焦（IEF），双向电泳等。

凝胶系统的均匀性：连续性凝胶电泳，不连续凝胶电泳

按外形：圆盘状电泳，水平板电泳，垂直板电泳及毛细管电泳等。

被分离的物质是否变性：非变性、变性（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）

从载体上：自由流电泳，凝胶电泳，琼脂糖电泳，纸电泳等。

四、电泳中的一些基本概念

1.凝胶浓度（T）

2.交联度（C）

3.分离胶

4.浓缩胶

5.迁移率

6.指示剂

7.聚合

8.固定

9.染色

10.脱色

五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

1. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点

（1）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的支持介质是聚丙烯酰胺凝胶。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(CH2=CHCONH2简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(CH2(NHCOHC=CH2) 2简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵 (简称AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶（其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节） ，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。常用于蛋白质的定性分析，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。

（2）SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种系统，即只有分离胶的连续系统和有浓缩胶与分离胶的不连续系统。

（3）强还原剂可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键， SDS与蛋白质充分定量结合（平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子），以使蛋白质完全变性和解聚，并形成棒状结构，消除了各种蛋白质本身电荷上的差异，从

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