第二期线栓MCAO造模技术答疑来了

快来看，你的难题如何解决

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精选答疑

1

大鼠MCAO模型应该如何操作？

答：大鼠MCAO模型操作如下：

Jin R, Zhu X, Li G. Embolic middle cerebral artery occlusion (MCAO) for ischemic stroke with homologous blood clots in rats[J]. JoVE (Journal of Visualized Experiments), 2014 (91): e51956.

2

再灌注如何操作，线栓在造模后期一般如何处理？

答：MCAO模型60-120min后，将线拴从颈内动脉向外拔出一段距离，使得颈总动脉的血液能够顺利回流到大脑中动脉中。造模后期线拴可以留在小鼠体内不做处理，但是要注意固定线拴的线头需要扎紧，避免出血。剪掉栓塞线多余部分，逐层缝合创口。

线栓在造模后期一般先用酒精消毒，避免可能的颅内感染。

3

如何判断老年鼠，如何确保老年鼠体重稳定在280g左右，目前研究老年鼠的文献多么，老年鼠研究最主要困难是什么，对老年鼠研究有什么建议？

答：老年鼠的判断标准：大鼠、小鼠的年龄在18-24个月以上。

如何控制体重在280g左右：饮食控制即可。280g可以控制每天摄食10-13g并随时监控。

目前对于老年鼠的研究：文献较多，研究类别也较丰富。由于小鼠寿命短，老年鼠易得，常用于研究衰老的起因和机理，神经细胞的凋亡规律，药物对学习和记忆功能、认知障碍的影响，抗衰老的作用，恢复老龄鼠的功能，包括神经干细胞增殖分化功能，以及一些免疫功能的研究。

老年鼠研究中的主要困难：饲养成本高，每一只老年鼠的饲养周期很长，购买费用高；在实验中，由于老年鼠的各器官已经老化，对老年鼠进行手术会导致死亡率高。

对老年鼠研究的建议：由于老年鼠的机能老化与人体许多功能很相似，建议多做老年鼠实验，尤其是老年鼠脑缺血模型的研究。

4

永损伤与短暂性损伤操作区域与判定标准区别？

答：操作区域都是阻塞大脑中动脉。缺血损伤是在脑缺血后不进行拔栓，而短暂性损伤在脑缺血60min，90min或者120min后有一个拔栓血液再灌注的过程。

判断标准：1）测脑血流：使用激光散斑血流成像系统测定小鼠两侧大脑的血流量。损伤的缺血大脑血流不会恢复，比正常对侧要低很多。短暂性损伤的缺血大脑再灌注后血流能够恢复到对侧的80%左右。2）TTC染色：永损伤的缺血性大脑损伤面积大，短暂性损伤的缺血性大脑损伤区域固定在皮层和纹状体之间。3）行为学：永损伤的小鼠死亡率很好，行为学无法恢复。短暂性损伤的小鼠在缺血后期（14-28天）行为学能够在一定的程度上恢复正常。

5

如何提升MCAO成功率，一般成功率是多少？

答：1）麻醉：首先要保证小鼠的麻醉状态平稳，良好的开端是成功的第一步。所以需观测小鼠的呼吸如胸廓起伏程度保证麻醉程度合适。应监视心率，呼吸频率和体温这三项基本指标。麻醉期间至少每15 分钟记录一次以上参数。

正常监控参数：

①呼吸频率应为55-100 次呼吸/分钟；麻醉期间呼吸频率下降50％可能是正常的；呼吸模式可用于监测麻醉，应呼吸均匀平缓而不应深而慢或快而浅。

②脉搏频率应为300-500 次/分钟。

③麻醉下的正常温度范围为36.5°C 至37.5°C。

④粘膜颜色应为粉红色或鲜红色，不应为淡白色或深褐色。⑤正常的毛细管再填充时间（CRT）