细胞核和线粒体的分离实验报告

实验五细胞核和线粒体的分离

一、实验目的

1

、了解用差速离心的方法分级分离细胞组分的原理和过程。

2

、熟悉离心机、匀浆器的使用方法。

二、实验原理

1

、分离纯化的方法

为了研究某种细胞器的结构、功能或制备某种生物大分子，常需

要大量采集细胞的某些亚组分，因此，有必要分离细胞器。

离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的

差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法。主要包括差速离心、密度梯

度离心等方法。

差速离心：采取逐渐提高离心速度的方法分离大小不同的细胞器。

被分离的分子越小，需要的离心速度越高。

密度梯度离心：预先装入有一定密度梯度的材料（蔗糖或甘油），

利用各种颗粒在梯度液中的沉降速度不同，使具有相同沉降速度的颗

粒处于同梯度层内。

匀浆介质：常用介质是缓冲的蔗糖溶液（

0.25mol/L

）。它比较

接近细胞质的分散相，具有足够的渗透压，防止颗粒膨胀破裂，对酶

活性干扰小，在

pH7.2-7.4

的条件下细胞器不易发生聚集。

2

、细胞器的鉴定

细胞核——姬姆萨染液线粒体——詹纳斯绿

 B 

詹纳斯绿

 B

（

Janus green B

）是线粒体的专一性活体染色剂。线

粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的

细胞质中染料被还原，成为无色状态。

三、实验用品

1

、试剂

:

生理盐水、

0.25mol/L

蔗糖＋

0.01mol/L Tris-

盐酸缓冲液

(pH7.4)

、

0.34mol/L

蔗糖＋

0.01mol/L 

Tris-

盐酸缓冲液

(pH7.4)

、

1%

詹纳斯绿

B 

染液、姬姆萨染液