所有实验均使用以下混合组分。本实验方案已经过优化，可用于新生大鼠心肌细胞的转染。对于需要更多转染混合物的实验，只需加倍使用下述试剂：对于 24 孔板上的细胞，搭配使用等量的相关质粒、标准化信号和 L7RH-β-Gal 质粒。接种后立即在各孔内加入 40 μL 内容物（20 μL 荧光素酶质粒和 20 μL β 半乳糖苷酶混合物）。所有混合操作（需要涡旋的除外）均应在无菌细胞培养罩中进行。

总体积

400 μL

600 μL

800 μL

无菌 2.5 M CaCl2

25 μL

37.5 μL

50 μL

质粒

10 μg

15 μg

20 μL

无菌水

加入后，共 200 μL。

加入无菌水，至总体积达 300 μL。

加入无菌水，至总体积达 400 μL。

将上述三种试剂装入 1.5 mL 无菌 Eppendorf 管，并放入培养罩中。轻柔混合。请勿涡旋。

无菌 2X HBS（hepes 缓冲盐水）

逐滴加入 200 μL 并轻柔搅拌上述混合物（在涡旋混匀仪上设置为 2）。

滴加 300 μL 并轻柔搅拌。然后多次翻转，充分混匀。

 滴加 400 μL。

添加 2X HBS 后，盖上 eppendorf 的盖子，并在室温下静置 15 分钟以上。可以将混合物用于细胞时，搭配使用等量的报告质粒和 β-gal 对照混合物。翻转数次，轻柔混匀，并在 24 孔板的每个孔内加入 40 μL 混合物（需要根据具体实验进行优化），轻柔涡旋细胞，以便将转染混合物分散到培养基中。在 10 cm 板上转染另一质粒/构建体时，向 6 mL 培养基中加入总体积为 300 μL 的转染混合物效果较好。

Richard Pattern 博士

塔夫茨新英格兰医学中心

分子心脏病学研究中心

马萨诸塞州波士顿