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电泳操作步骤：

试剂配制

：

（实验中采用均为分析纯）

（

1

）丙烯酰胺贮液

（

4

℃下棕色瓶中储存，试剂尽量勿存储过久）

丙烯酰胺贮液（

T=30%

，

C=3%

）

称取

29.1 g

丙烯酰胺和

0.9 g

甲叉双丙烯酰胺，用双蒸水溶解，定容至

100 ml

，

过滤备用。

(

试剂有毒，操作中注意防护

)

（

2

）浓缩胶缓冲液（

1 

mol/L 

Tris-HCl

，

pH 

6.8

）

（

4

℃下棕色瓶中储存，试剂尽

量勿存储过久）

6.06 g Tris

溶解于

35 ml

双蒸水中，用浓盐酸调节

pH

至

6.8

，再用双蒸水定容至

50 ml

。

（

3

）分离胶缓冲液（

1.5 mol/L Tris-HCl

，

pH 8.8

）

（

4

℃下棕色瓶中储存，试剂尽

量勿存储过久）

18.16 g Tris

溶解于

75 ml

双蒸水中，

用浓盐酸调节

pH

至

8.8

，

再用双蒸水定容至

100 ml

。

（

4

）

10% SDS 

（

5

）

10% 

过硫酸铵（

APS

）

：使用前新鲜配制，低浓度

APS

一般当天用当天配

制，勿过夜使用。

（

6

）尿素

（

7

）

TEMED(N

，

N

，

N’

，

N’

-

四甲基乙二胺

) 

（

8

）电极缓冲液

(1×

) 

（棕色瓶中

4

℃储存，一般使用

3-4

次）

0.025 mol/L Tris

，

0.192 mol/L

甘氨酸，

0.1% SDS

，

pH 8.3 

（

9

）电极缓冲液

(2×

) 

（棕色瓶中

4

℃储存，一般使用

3-4

次）

0.050 mol/L Tris

，

0.384 mol/L

甘氨酸，

0.1% SDS

，

pH 8.3 

（

10

）样品缓冲液（

pH 6.8

）

（

4

℃下棕色瓶中储存，试剂尽量勿存储过久）

1.6 ml

浓缩胶缓冲液

（

pH 6.8

）

+ 4 ml 10% SDS + 0.6 g

二硫苏糖醇

(DTT) + 2.5 ml 

87%

甘油

+0.1 mg

溴酚蓝，用双蒸水稀释到

20 ml. 

（

11

）考玛斯亮蓝

R-250

染色方法：