实验员小哈的个人空间_哔哩哔哩_Bilibili

正常情况下，六孔板的每个孔长满约有100万个细胞，加入40μL蛋白裂解液，测得的蛋白浓度约为3-5μg/μL，也就是说总蛋白150-200μg。

点样的时候，每个泳道点30μg蛋白，这对于一般的WB检测已经足够了。

通常我们跑WB，最多需要配4块胶，每块胶检测3-4种不同分子量的蛋白。（最多需检测16种蛋白，你见过更多的吗）

一次性跑3-4块胶，看似麻烦，其实是在省时间。

因为我想收一次蛋白样品就用完扔掉，检测出所有想检测的蛋白，而不是只跑两块胶，再去用stripping buffer，多花费了一天时间。

不少试剂公司都有卖stripping buffer，按照产品说明书正确使用，剥离一抗的效果确实不错。

如果经费不足，可以按照abcam提供的stripping buffer 配方来配。

下载：https://docs.abcam.com/pdf/protocols/western-blot-membrane-stripping-for-restaining-protocol.pdf

选择合适的蛋白Marker也很重要，marker条带多，意味着可以在一张膜上多剪一条带，多孵育一种蛋白。

事实上，WB最重要的步骤之一是测定蛋白浓度：浓度测得不准，最终得到的结果就很难看。

把标准蛋白样品（5mg/mL）用蛋白裂解液稀释成1.25，2.5mg/mL，每次测浓度时都拟合出一条标准曲线，这样得到的浓度更准确，有利于后续结果分析。